標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代超5代還能用嗎？——法規(guī)要求與實(shí)驗(yàn)室管理實(shí)踐指南
標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代超過(guò)5代原則上不建議使用，但在特定條件下仍可使用，前提是實(shí)驗(yàn)室能證明其關(guān)鍵特性未發(fā)生改變。以下從法規(guī)依據(jù)、實(shí)際管理、風(fēng)險(xiǎn)控制三個(gè)維度進(jìn)行系統(tǒng)說(shuō)明：
一、法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)中的明確要求
1. 《中國(guó)藥典》2020年版（四部）9203指導(dǎo)原則
“工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過(guò)5代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過(guò)度傳代增加菌株變異的風(fēng)險(xiǎn)。”
第0代：從ATCC、CMCC等權(quán)威保藏機(jī)構(gòu)獲得的原始凍干管或冷凍管。 第1代：首次復(fù)蘇后轉(zhuǎn)接所得。 … 第5代：最多允許用于日常實(shí)驗(yàn)的工作代次。
2. CNAS-CL01-A001:2022（微生物檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用說(shuō)明）
“所有的標(biāo)準(zhǔn)菌種從原始標(biāo)準(zhǔn)菌種到儲(chǔ)備菌株和工作菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)原則上不得超過(guò)5次，除非標(biāo)準(zhǔn)方法中有明確要求，或?qū)嶒?yàn)室能夠證明其相關(guān)特性沒(méi)有改變。”
3. GB 4789.28-2024（食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）
也強(qiáng)調(diào)了標(biāo)準(zhǔn)菌株→標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株→工作菌株的三級(jí)管理體系，并限制工作菌株代次≤5。
二、超過(guò)5代是否“絕對(duì)不能用”？
不是絕對(duì)禁止，但有條件使用：
前提條件：
實(shí)驗(yàn)室已對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化、分子特征（如16S rRNA測(cè)序）等全面鑒定； 確認(rèn)其純度、活力、典型特征未發(fā)生變異； 有完整的傳代記錄與驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持； 非用于法定檢驗(yàn)、認(rèn)證檢測(cè)或GMP/GLP合規(guī)性試驗(yàn)
（這些場(chǎng)景通常強(qiáng)制執(zhí)行≤5代）。 現(xiàn)實(shí)情況：
有些科研實(shí)驗(yàn)室在非關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)中會(huì)使用6~8代甚至更多代次的菌株； 若實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好、表型穩(wěn)定，可能“暫時(shí)可用”； 但一旦出現(xiàn)異常結(jié)果，首先應(yīng)懷疑菌株退化或污染。
結(jié)論：
超過(guò)5代≠立即報(bào)廢，但必須經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；若無(wú)驗(yàn)證能力或用于合規(guī)性檢測(cè)，則嚴(yán)禁使用。
三、實(shí)際管理建議（最佳實(shí)踐）
| 1. 建立清晰的代次記錄 | |
| 2. 制備充足的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 | |
| 3. 工作菌株限用≤5代 | |
| 4. 定期驗(yàn)證關(guān)鍵特性 | |
| 5. 出現(xiàn)異常立即停用 |
四、一句話總結(jié)
“5代是紅線，不是死線；超代可用，但須驗(yàn)證；無(wú)驗(yàn)證，寧棄勿用。”
在科研探索中可適度靈活，但在質(zhì)量控制、藥品檢驗(yàn)、食品檢測(cè)等法規(guī)遵從性場(chǎng)景中，必須嚴(yán)格執(zhí)行≤5代的規(guī)定，這是保證數(shù)據(jù)可靠性與合規(guī)性的基本要求。標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代超過(guò)5代原則上不建議使用，但在特定條件下仍可使用，前提是實(shí)驗(yàn)室能證明其關(guān)鍵特性未發(fā)生改變。以下從法規(guī)依據(jù)、實(shí)際管理、風(fēng)險(xiǎn)控制三個(gè)維度進(jìn)行系統(tǒng)說(shuō)明：
一、法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)中的明確要求
1. 《中國(guó)藥典》2020年版（四部）9203指導(dǎo)原則
“工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過(guò)5代（從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代），以防止過(guò)度傳代增加菌株變異的風(fēng)險(xiǎn)。”
第0代：從ATCC、CMCC等權(quán)威保藏機(jī)構(gòu)獲得的原始凍干管或冷凍管。 第1代：首次復(fù)蘇后轉(zhuǎn)接所得。 … 第5代：最多允許用于日常實(shí)驗(yàn)的工作代次。
2. CNAS-CL01-A001:2022（微生物檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用說(shuō)明）
“所有的標(biāo)準(zhǔn)菌種從原始標(biāo)準(zhǔn)菌種到儲(chǔ)備菌株和工作菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)原則上不得超過(guò)5次，除非標(biāo)準(zhǔn)方法中有明確要求，或?qū)嶒?yàn)室能夠證明其相關(guān)特性沒(méi)有改變。”
3. GB 4789.28-2024（食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）
也強(qiáng)調(diào)了標(biāo)準(zhǔn)菌株→標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株→工作菌株的三級(jí)管理體系，并限制工作菌株代次≤5。
二、超過(guò)5代是否“絕對(duì)不能用”？
不是絕對(duì)禁止，但有條件使用：
前提條件：
實(shí)驗(yàn)室已對(duì)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化、分子特征（如16S rRNA測(cè)序）等全面鑒定； 確認(rèn)其純度、活力、典型特征未發(fā)生變異； 有完整的傳代記錄與驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持； 非用于法定檢驗(yàn)、認(rèn)證檢測(cè)或GMP/GLP合規(guī)性試驗(yàn)
（這些場(chǎng)景通常強(qiáng)制執(zhí)行≤5代）。 現(xiàn)實(shí)情況：
有些科研實(shí)驗(yàn)室在非關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)中會(huì)使用6~8代甚至更多代次的菌株； 若實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好、表型穩(wěn)定，可能“暫時(shí)可用”； 但一旦出現(xiàn)異常結(jié)果，首先應(yīng)懷疑菌株退化或污染。
結(jié)論：
超過(guò)5代≠立即報(bào)廢，但必須經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；若無(wú)驗(yàn)證能力或用于合規(guī)性檢測(cè)，則嚴(yán)禁使用。
三、實(shí)際管理建議（最佳實(shí)踐）
| 1. 建立清晰的代次記錄 | |
| 2. 制備充足的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 | |
| 3. 工作菌株限用≤5代 | |
| 4. 定期驗(yàn)證關(guān)鍵特性 | |
| 5. 出現(xiàn)異常立即停用 |
四、一句話總結(jié)
“5代是紅線，不是死線；超代可用，但須驗(yàn)證；無(wú)驗(yàn)證，寧棄勿用。”
在科研探索中可適度靈活，但在質(zhì)量控制、藥品檢驗(yàn)、食品檢測(cè)等法規(guī)遵從性場(chǎng)景中，必須嚴(yán)格執(zhí)行≤5代的規(guī)定，這是保證數(shù)據(jù)可靠性與合規(guī)性的基本要求。
