從“菌種”到“工作菌株”：實驗室菌種傳代的規范流程！
從“菌種”到“工作菌株”的傳代過程在微生物實驗室中具有嚴格的操作規范和管理要求，目的是確保菌株活性、純度、遺傳穩定性及可追溯性。以下是依據現行標準（截至2025年底）整理的規范流程：
一、基本概念區分
原始標準菌株（第0代）：由權威保藏機構（如ATCC、CMCC、CGMCC等）提供，通常以凍干或超低溫形式保存。
儲備菌株（第1代）：由標準菌株首次活化后制備并冷凍保存，用于后續傳代。
工作菌株（第2–4代）：由儲備菌株傳代獲得，用于日常實驗或質量控制，傳代次數不得超過5代（依據《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》9203）。
超過5代可能導致遺傳漂變、表型改變或喪失標準特性。
物料平衡
新購菌種或滅菌后的瓊脂斜面需在室溫下平衡30分鐘，避免溫差導致冷凝水污染。 人員防護
更換專用潔凈服，佩戴N95口罩、無菌手套； 使用消毒液徹底清潔雙手； 在陽性操作室或生物安全柜內操作。
三、標準傳代操作流程
步驟1：活化（第0代 → 第1代）
從凍存管（如-80℃甘油管或凍干管）中取菌； 接種至非選擇性固體培養基（如營養瓊脂斜面或平板）； 適宜溫度培養（如35±1℃，18–24小時）； 獲得第1代儲備菌株，部分用于保存，部分用于下一輪傳代。
步驟2：傳代培養（第1代 → 第2–4代工作菌株）
常用方法包括：
| 斜面劃線法 | ||
| 平板四區劃線法 | ||
| 涂布法 | ||
| 液體接種法 |
所有工具（接種環、針、移液器吸頭等）必須無菌，使用前后灼燒或更換。
四、記錄與標識
每支菌株必須標注并記錄以下信息：
菌種名稱（含屬、種、保藏編號，如 E. coli ATCC 25922） 傳代日期 當前代數（如P2、P3） 培養基類型與培養條件（溫度、時間、需氧/厭氧） 保藏位置（冰箱編號、凍存盒位置） 操作人簽名
建議使用電子或紙質《菌種傳代與使用記錄表》，實現全程可追溯。
五、保存與銷毀
短期保存：斜面4–6℃，保存數周至數月，需定期轉接；
長期保存：甘油管（-80℃）、冷凍干燥、液氮等；
銷毀：污染或超代菌株需經121℃高壓滅菌30分鐘以上后廢棄。
六、關鍵法規依據（截至2025年）
《中國藥典》通則9203《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》 《微生物實驗室菌株管理全流程規范》 ISO 11133:2014（培養基質量控制） 各保藏中心（ATCC/CGMCC等）提供的說明書
總結：
從原始菌種到工作菌株，核心在于控制代數、防止污染、規范操作、完整記錄。只有嚴格遵循標準化流程，才能確保實驗結果的可靠性與合規性。
