細(xì)胞給藥怎么給？
藥物濃度的精確控制對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。正確的細(xì)胞給藥不僅能夠確保實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臏?zhǔn)確性，還能有效評(píng)估藥物的效果。
精確計(jì)算藥物濃度
在準(zhǔn)備藥物溶液時(shí)，需要特別注意以下幾點(diǎn)：
1. 確保藥物純度：使用高質(zhì)量的藥物，并用精密儀器準(zhǔn)確稱量。
2. 選擇合適的溶劑：例如，DMSO是一種常用的溶劑，但必須稀釋至1000倍以下，以避免對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。
3. 促進(jìn)藥物溶解：通過攪拌、振蕩或超聲等方法確保藥物充分溶解。
4. 稀釋至所需濃度：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將藥物溶液稀釋至所需濃度，并進(jìn)行過濾以去除可能的微生物污染。
5. 儲(chǔ)存條件：根據(jù)藥物的穩(wěn)定性要求，將其儲(chǔ)存在適宜的條件下，并在必要時(shí)檢測(cè)藥物濃度，確保其準(zhǔn)確性。
如何給藥：
細(xì)胞給藥通常按照以下公式進(jìn)行計(jì)算：
細(xì)胞內(nèi)藥物濃度=給藥濃度×細(xì)胞攝入率×細(xì)胞量/細(xì)胞體積
具體步驟
1. 藥物配制：
固體藥物配制：藥物質(zhì)量(mg)=要達(dá)到的濃度(mM)×溶劑體積(L)×藥物的分子量
液體藥物配制：起始濃度=最終濃度×最終體積
2. 設(shè)置合適的給藥濃度：
查閱相關(guān)文獻(xiàn)，明確給藥濃度。
設(shè)置劑量梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過兩次預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出合適的藥物濃度。
3. 向培養(yǎng)細(xì)胞板內(nèi)加入不同濃度藥物：
懸浮細(xì)胞先離心，貼壁細(xì)胞可直接吸走舊的培養(yǎng)基。
貼壁細(xì)胞需用PBS溶液進(jìn)行清洗，蓋板后呈“8”字晃動(dòng)，吸走PBS。
純白組無細(xì)胞，只加入培養(yǎng)基；對(duì)照組有細(xì)胞，加培養(yǎng)基不加藥；剩余8孔按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加入不同濃度的藥物及培養(yǎng)基。
藥物配制過程中，還需嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)程，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。同時(shí)，要注意藥物的溶解性和穩(wěn)定性，選擇恰當(dāng)?shù)娜軇┖蛢?chǔ)存條件。所有操作都應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求嚴(yán)格執(zhí)行。
