內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

原理

內(nèi)皮細(xì)胞易于從血管分離進(jìn)行培養(yǎng)成單層細(xì)胞，對研究內(nèi)皮細(xì)胞再生生、腫瘤促血管生長因子（TAF）等有很大應(yīng)用價值。人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)可應(yīng)用人臍帶臍靜脈、動物大動脈等，用灌流消化法獲取細(xì)胞最為簡便。

材料與儀器

臍帶
膠原酶 消化液 PBS
注射器 離心管 培養(yǎng)基

步驟

1.  取產(chǎn)后的新鮮臍帶；如不立即培養(yǎng)可保存于4 ℃中，但不宜超過12 小時；無菌剪取長10~15 厘米一段。其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養(yǎng)；

2.  先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血；注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流；

3.  用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入最終濃度為0.1 %的膠原酶，待末端出現(xiàn)液體后結(jié)扎之，令充滿血管，注入口應(yīng)應(yīng)結(jié)扎，以防液體返流，消化3~10 分鐘；

4.  吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液，注入離心管中；為獲取更多細(xì)胞，可再注入溫PBS沖洗2~3 次徹底清除干凈殘余細(xì)胞，一并注入離心管中離心；

5.  吸除上清，加1640培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，接種入瓶皿中培養(yǎng)，順利時2~3 天內(nèi)細(xì)胞即可長成單層。

常見問題

一、討論
內(nèi)皮細(xì)胞生長后，開始細(xì)胞成梭形，類成纖維細(xì)胞，連接成片后始顯內(nèi)皮細(xì)胞形狀。

首次用膠原酶消化時，應(yīng)做預(yù)試驗(yàn)，以找出最佳消化時間，以防止消化不足細(xì)胞未脫落，也避免因消化過度使內(nèi)皮細(xì)胞底層成纖維細(xì)胞混入。我們曾試用胰蛋白酶消化，效果遠(yuǎn)不如膠原酶好。

人臍帶易于獲得，培養(yǎng)效果好；細(xì)胞生生后，一般傳6~7 代后即衰退，難以長期維持。

用兔血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)較好，可傳10~30 代；不同部位血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，對各種作用因素反應(yīng)亦有很大差別。