僅擴增全長cDNA末端的高級RACE方法

為了獲得全長的cDNA 5’及3’末端序列，許多研究人員使用了稱之為cDNA末端快速擴增，或RACE的方法。傳統的RACE方法得到的PCR產物含有全長及斷裂的cDNA產物。GeneRacer?試劑盒確保您只得到含有全長cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的結果并節省您的時間

GeneRacer?的優點：

確定一個基因的全長序列對于研究異源轉錄起始和得到用于蛋白表達的開放閱讀框至關重要。GeneRacer?是一種高級RACE技術，提高了擴增全長cDNA末端序列的效率。使用GeneRacer?試劑盒，您可以得到：

完整序列： 克隆基因片段的全長5'和3'末端以構建完整的cDNA序列

靈敏： 得到每個細胞中拷貝數低至30的稀有轉錄本的全長5’和3’末端

長度： 可以由長度至少為9kb的轉錄本得到cDNA

僅通過一輪PCR反應就可以得到這些結果。一般不需進行巢式PCR，所以僅試一次就可以得到結果。

全長5’末端選擇：

傳統的RACE會得到多個PCR結果，因為其所使用的cDNA來源于斷裂及全長mRNA。研究人員必須鑒定每一個PCR產物以獲得帶有全長5’末端序列的產物。GeneRacer?只針對全長的5’加帽mRNA，從而節省了花費在篩選大量PCR產物上的時間。圖一 示意GeneRacer?的工作原理。RNA樣品經CIP和TAP處理，保證GeneRacer?寡聚RNA僅同全長轉錄本連接。然后使用SuperScriptⅡ逆轉錄酶對這些轉錄本逆轉錄，得到的cDNA做為PCR的模板。GeneRacer?寡聚RNA序列做為GeneRacer? 5’引物結合位點，這樣，只有具有全長5’末端的cDNA才會被擴增。使用GeneRacer?步驟及高保真度Platinum? Taq DNA聚合酶，就可以確保得到最高效的實驗結果。