水產(chǎn)品中苯并(a)芘的測(cè)定——高效液相色譜法（二）
6.2提取
稱取試樣5 g(精確至0. 01 g)，加入250 mL三角瓶中，加入25 mL甲醇和50%的氫氧化鉀溶液(4. 8) 10 mL,在60°C水浴中浸提30 min,不時(shí)振搖。然后再超聲振蕩10 min,轉(zhuǎn)移至100 mL聚丙烯離心管中，加入20 mL正己烷，渦旋混勻5 min,4 000 r/min離心10 min分層,取上層正己烷相經(jīng)無水硫酸鈉柱濾入100 mL圓底燒瓶中，再用15 mL正己烷按上述操作重復(fù)提取水相一次。將提取液在50°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),當(dāng)圓底燒瓶中剩下約1 mL液體時(shí)，取下圓底燒瓶，將液體移入試管中，再加入2 mL正己烷清洗，合并到試管中,重復(fù)清洗一次，收集的液體留過柱用。
6.3凈化
先使用3 mL二氯甲烷、5 mL正己烷活化固相萃取柱(4. 7),流速約為2 mL/min。將提取液用10 mL 正己烷洗入柱子中，再用8 mL的正己烷-二氯甲烷溶液(4. 9)洗脫，用50 mL圓底燒瓶收集洗脫液。將洗脫液在50°C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，待瓶中剩下約1 mL時(shí),取下圓底燒瓶，將液體移入試管中，再加入 2mL正己烷清洗圓底燒瓶2次,合并至試管中，氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確加入1.00 mL乙腈，超聲溶解后，用 0. 45 μm的微孔濾膜過濾，供高效液相色譜儀測(cè)定。
6.4試樣測(cè)定
6.4. 1色譜條件
6.4. 1.1色譜柱:反相C18 ,250 mmX4.6 mm,粒度5μm；或與之相當(dāng)?shù)纳V柱。
6.4.1.2流動(dòng)相：乙腈+水(75 + 25)。
6. 4.1.3 流速:1. 0 mL/ min。
6.4. 1.4 柱溫：35°C。
6.4.1.5檢測(cè)器波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)297 nm,發(fā)射波長(zhǎng)405 nm。
6.4. 1.6進(jìn)樣量：20μL。
6.4. 2色譜分析:分別取標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.12)和試樣提取液于液相色譜儀中,按上述色譜條件進(jìn)行色譜分 析,記錄分析結(jié)果，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄A。
6. 5空白試驗(yàn)
不加試樣，在相同試驗(yàn)條件下,與試樣測(cè)定的同批進(jìn)行空白試驗(yàn)。
7計(jì)算
試樣中苯并(a)芘的含量按式(1)計(jì)算。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。結(jié)果保留3位有效數(shù)字。
式中：
X——試樣中苯并(a)芘的含量，單位為微克每千克(μg/ kg)；
C——試樣中苯并(a)芘的含量，單位為微克每毫升(μg/ mL);
m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);
V—試樣定容的體積，單位為毫升(mL)。
8方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度
8. 1靈敏度
本方法最低檢出限為0. 1 μg/kg,最低定量限為0. 5μg/kg。
8.2準(zhǔn)確度
本方法添加濃度為0. 5 μg/kg?40μg/kg時(shí)，回收率為75%?110%。
8.3精密度
本方法批內(nèi)和批間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜15 %。
文章來源：《水產(chǎn)品獸藥殘留限量及監(jiān)測(cè)方法查詢手冊(cè)》
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