植物組織中可溶性糖含量的測定

簡介

可溶性糖多是帶有甜味的一些糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖等。可溶性糖含 量是果實品質的一項重要指標，果實成熟過程中可溶性糖含量增加。可溶性糖也是植物細胞 滲透調節物質之一，干旱條件下植物組織中可溶性糖含量增加。測定可溶性糖含量可用于分 析果實品質，了解植物的生理狀況。本實驗目的在于掌握蔥酮比色法測定可溶性糖含量的原 理和方法。

原理

植物組織中可溶性糖含量的測定的基本原理是糖(sugar)在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛 或羥甲基糠醛與蔥酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍綠色，其吸收峰為625 nmo在一定 范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比, 故可用于糖的定量測定。

材料與儀器

材料：各種植物組織，如根、莖、葉、果實、種子等。

器材：分光光度計，天平，水浴鍋，離心機或漏斗，具塞刻度試管，容量瓶，移液管等。

試劑：

①80% 乙醇

②100μg·mL-1標準葡萄糖溶液：準確稱取烘干至恒重的葡萄糖 100 mg, 用 80% 乙醇溶解后定容至1 000 mL

③蔥酮試劑：稱取蔥酮0.1 g溶于100 mL硫酸溶液（將76 mL相對密度為1.84的濃硫酸用蒸餡水稀釋到100 mL）, 貯于棕色瓶，當日配制使用。

步驟

植物組織中可溶性糖含量的測定的基本過程可分為如下幾步：

1. 標準曲線的制作：取7支大試管，按表52-1添加試劑，立即搖勻，蓋上蓋子，在沸水浴中 煮沸10 min, 取出冷卻至室溫，用0管調零，在625 nm波長下比色。以標準葡萄糖含量作橫 坐標，以吸光度值作縱坐標，繪制標準曲線。

表52-1標準曲線制作加樣表

2. 樣品提取：將植物組織烘干、粉碎，準確稱取50?250 mg, 放入具塞刻度試管中，加 80% 乙醇10?15 mL, 沸水浴提取30 min。離心后收集上清液，其殘渣再加80% 乙醇10? 15 mL重復提取2次，合并上清液。如是綠色組織，提取液需加少量活性炭于70笆下脫色、過 濾?定容至50 mL待測。如為鮮樣，稱取0.5-1 g, 加少許石英砂研磨成勻漿，連同殘渣一起 用蒸餡水定容至100 mL, 室溫下浸提30?60 min, 其間經常搖動，離心或過濾，棄去殘渣，測 前適當稀釋。

3. 樣品測定：吸取1 mL提取液于大試管中，加入5 mL蔥酮試劑，搖勻，用上述同樣方 法，在625 nm處比色，記錄吸光度值，從標準曲線上查出提取液中的可溶性糖含量。

4 . 結果計算：

可溶性糖含量=我貞><1。。％

式中：一從標準曲線上査得的蔗糖濃度，卩 g.mL-1 ；

V—樣品總體積，mL；

W—樣品重，mg。

注意事項

1. 提取可溶性糖所剩殘渣放在 80°C 烘箱中烘干，可用于測定淀粉和纖維素。

2. 由于蔥酮試劑與糖反應的呈色強度隨時間變化，故必須在反應后立即在同一時間比色。