乳腺干細胞的培養實驗

材料與儀器

乳腺干細胞
D920細胞或等同物 H14培養基 DMEM 0.5FB EDTA:DMEM 含有0.5% FBS和0.1mmol EDTA 不含血清的DMEM Matrigel
抗鼠igG磁珠 MACS柱 含冰的冰盒

步驟

(a)在I型膠原包被的培養瓶中用H14培養基培養D920細胞至70%?80%匯合。

(b)消化細胞，用DMEM/0.5FB/EDTA重懸至l×107個細胞/ml。

(c)加人1:50稀釋的抗ESA抗體，置冰上孵育30 min。

(d)用10ml無血清的DMEM洗滌一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重懸至1×107個細胞/ml。

(e)按照制造商推薦的濃度，加人抗鼠IgG磁珠，置冰上孵育30 min。

(f)用10 ml無血清的DMEM洗滌一遍，然后用DMEM/0.5FB/EDTA重懸至1×107個細胞/ml。

(g)將細胞懸液加人到合適體積的MACS柱中。

(h)用3倍細胞懸液體積的DMEN/0.5FB/EDTA培養基洗滌MACS柱。

(i)從磁鐵上取下柱子，用H14培養基洗脫。

(j)將基底膜基質（Matrigel)置于冰上，在24孔板中每孔加人5μL包被。

(k)置37℃，10 min使之聚合。

⑴與此同時，用300μ1冰浴的Matrigel重懸1×103?1×104的D920細胞。

(m)加人到包被的24孔板中，置37℃,10 min使之聚合。

(n)加入H14培養基，每2天換液。