酸性磷酸酶活性測定

簡介

酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）廣泛存在于各種細胞中，在部分癌細胞中酸性磷酸酶往往會異常表達。以對硝基酚磷酸鈉作為酸性磷酸酶反應底物，在堿性條件下能夠水解生成黃色的對硝基酚，通過比色測定即可對 ACP 進行定量分析。

用途

用以測定組織或細胞中 ACP 的水平。

材料與儀器

組織或細胞，RIPA（中弱）裂解液，對硝基酚磷酸鈉溶液，緩沖液

分光光度計，恒溫水浴鍋，剪刀，研缽，試管等

步驟

1. 取細胞沉淀或組織，加入 RIPA 裂解液，使用剪刀或研缽對細胞或組織進行充分裂解（置于冰上），將裂解液收集至離心管中，4 °C 下 15000 rpm 離心 15 min，收集上清液，此時上清液中包含酸性磷酸酶。

2. 加入緩沖液和對硝基酚磷酸鈉溶液。取少量上清液，加 ddH2O 進行稀釋（稀釋約 5~10 倍），向陰性對照組（無酸性磷酸酶組）與測定酶活組加入的緩沖液與對硝基酚磷酸鈉溶液等量。混勻后，在 37 °C 恒溫水浴鍋中保溫反應 10~15 min，每5min搖動一次，反應結束后，加入 0.5 M NaOH 溶液終止反應。此時 pH = 14，取 1 mL 液體在分光光度計 400 nm 下測試吸光度。

3. 酶活性（V：酶的體積，V1：每次用酶的體積）

注意事項

1. 反應要在冰上進行，全程保持低溫操作。

2. 提取得到的酶應該立刻進行反應，保存于 -20 °C 也要盡快進行試驗。

3. 加入 NaOH 后，對硝基酚呈現黃色。