微生物分離純化實(shí)驗(yàn)-平板劃線分離法
原理
該方法操作簡(jiǎn)便，普通用于微生物的分離與純化。
其基本原理包括兩方面：
1. 選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、濕度和氧等要求或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從面淘汰一些不需要的微生物。
2. 微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲取單個(gè)菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線等技術(shù)完成。
材料與儀器
米曲霉 土樣
10％ 酚 無(wú)菌水 鏈霉素
玻璃涂棒 試管 無(wú)菌三角瓶 玻璃珠 無(wú)菌吸管 接種環(huán) 無(wú)菌培養(yǎng)皿 顯微鏡 記號(hào)筆 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
步驟
1. 倒平板
按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱、土樣編號(hào)和實(shí)驗(yàn)曰期。
2. 劃線
在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述10-1的土壤懸液一環(huán)在平板上劃線（見圖 VII-5）。劃線的方法很多，但無(wú)論采用哪種方法，其目的都是通過(guò)劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使之形成單個(gè)菌落。
常用的劃線方法有下列二種：
①用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取土壤懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線 3～4 條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約 70° 角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同樣的方法通過(guò)第二次劃線部分作第三次劃線和通過(guò)第三次平行劃線部分作第四次平行劃線（圖 VII-6，A），劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，置于溫室培養(yǎng)。
②將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線（圖VII-6，B）劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。
3. 挑菌落
同稀釋涂布平板法，一直到分離的微生物認(rèn)為純化為止。
注意事項(xiàng)
值得指出的是從微生物群體中經(jīng)分離生長(zhǎng)在平板上的單個(gè)菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)待征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列的分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定方能得到。
