人類免疫缺陷病毒標(biāo)本采集及處理方法
簡介
艾滋病檢測最常用的標(biāo)本是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時(shí)也可作為測試樣品。標(biāo)本采集和處理參照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年版）》。
原理
人類免疫缺陷病毒標(biāo)本采集及處理方法的基本原理是 HIV 感染的診斷是以實(shí)驗(yàn)室檢查為基礎(chǔ)，結(jié)合臨床表現(xiàn)和參考流行病學(xué)資料綜合進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室檢查需根據(jù)檢測目的和檢測項(xiàng)目不同，采集不同標(biāo)本種類。
材料與儀器
器材：真空采血管或一次性注射器、采血針、離心機(jī)等。
步驟
人類免疫缺陷病毒標(biāo)本采集及處理方法的基本過程可分為如下幾步：
（一）標(biāo)本采集
A 血液
① 靜脈血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（或未加抗凝劑）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑（或未加抗凝劑）的試管中，輕輕顛倒混勻 6~8 次，備用；
②末梢血（通常為指尖血）：消毒局部皮膚（成人和 1 歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或示指。1 歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌棉簽擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。
B 尿液
使用清潔的容器收集尿液。女性應(yīng)避開月經(jīng)期。尿液樣品可以在 2~8 ℃ 存放。
C 唾液
使用檢測試劑盒提供的容器收集唾液樣品。
（二）標(biāo)本處理
用于核酸定性檢測時(shí)，采集的抗凝全血應(yīng)在 4~8 小時(shí)內(nèi)分離 PBMC 和血漿，否則應(yīng)在 24~48 小時(shí)內(nèi)分離血漿和血細(xì)胞。
A 血漿：將采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。
B 血清：根據(jù)需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取 5~10 ml 靜脈血，室溫下自然放置 1~2 小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。
C 淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 離心 15 分鐘，吸取血漿層下的淋巴細(xì)胞富集液，置于合適的容器中，備用。
D PBMC：使用淋巴細(xì)胞分離液，進(jìn)行密度梯度離心，吸出 PBMC 層，備用。
注意事項(xiàng)
1 采樣時(shí)間：采集抗凝全血用于 CD4+ T 淋巴細(xì)胞測定時(shí)，由于 CD4+ T 淋巴細(xì)胞數(shù)存在日間自然變化的個(gè)體差異，每一患者采樣時(shí)間應(yīng)盡可能集中在某個(gè)相同的時(shí)段。如：每次采樣時(shí)間均在上午或均在下午。
2 采集要求：采樣前要檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間。
抽取靜脈血液（或以其他方式收集血液樣品）時(shí)要注意安全，應(yīng)使用一次性注射器或一次性真空采血管，采血部位要嚴(yán)格消毒，戴手套，謹(jǐn)慎操作，防止刺傷皮膚和造成外界環(huán)境污染。不在現(xiàn)場檢測的樣品，通常采集 5 ml 靜脈血，現(xiàn)場分離血清或血漿后直接送到相關(guān)的檢測點(diǎn)或篩查實(shí)驗(yàn)室。
采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險(xiǎn)品容器里，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露，遵守生物安全要求。
3 樣品的保存：① 用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于 - 20 ℃ 以下，短期（1 周）內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于 2~8 ℃；② 用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于 - 20 ℃ 以下，進(jìn)行病毒 RNA 檢測的樣品如需保存 3 個(gè)月以上應(yīng)置于 - 80 ℃；③ 用于 CD4+/CD8+ T 淋巴細(xì)胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時(shí)間超過 48 小時(shí)則不可檢測。
4 標(biāo)本的包裝與運(yùn)送：實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運(yùn)送全血。標(biāo)本運(yùn)送時(shí)應(yīng)采用三層容器進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。樣品的運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求，要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。
