選擇性剝離法進(jìn)行有絲分裂期同步

材料與儀器

細(xì)胞
諾考達(dá)唑
培養(yǎng)瓶 試管

步驟

1. 往 175 cm2 規(guī)格的培養(yǎng)瓶中接種細(xì)胞，培養(yǎng)至匯合率達(dá) 60%~80%。

2. 用力敲打培養(yǎng)瓶 10 次，然后吸去培養(yǎng)液，以去除松散貼壁的細(xì)胞，死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。

3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 諾考達(dá)唑的預(yù)溫培養(yǎng)基，重新放回溫箱孵育 4 小時(shí)。

4. 將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入無(wú)菌試管中。

5. 中等用力拍擊培養(yǎng)瓶以剝離有絲分裂細(xì)胞，用 5 ml 原來(lái)的含諾考達(dá)唑培養(yǎng)液涮洗瓶子兩次，再轉(zhuǎn)入一支新的試管中。收集到的有絲分裂的細(xì)胞能室溫放置，然后處理其余的培養(yǎng)瓶。每只瓶子的細(xì)胞產(chǎn)量為 3X105~4X106 。

6. 合并所有瓶中的有絲分裂細(xì)胞，分析有絲分裂細(xì)胞的百分比。

7. 要得到 G1 期細(xì)胞，600 g，37℃ 離心 8 分鐘，用不含諾考達(dá)唑的培養(yǎng)基于 37℃ 重懸細(xì)胞，每 175 cm2 規(guī)格培養(yǎng)瓶接種 1X107 細(xì)胞，培養(yǎng) 3~4 細(xì)胞，收獲。