提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率的實(shí)驗(yàn)

原理

根據(jù)人們的經(jīng)驗(yàn)，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。
當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況：

1.  完全無細(xì)胞游出或移動(dòng)；
2.  有細(xì)胞移動(dòng)和游出，但無細(xì)胞增殖，細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代；

3.  有細(xì)胞增殖，傳若干代后停止生長(zhǎng)或衰退死亡；

4.  傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后，才又呈旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長(zhǎng)的腫瘤傳代細(xì)胞系。

以上現(xiàn)象說明腫瘤細(xì)胞對(duì)體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一些特殊的措施。

材料與儀器

瘤組織
Hanks
棉球

步驟

一、適宜底物

如：把經(jīng)過純化的細(xì)胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細(xì)胞層等。

二、生長(zhǎng)因子

應(yīng)用促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長(zhǎng)物，常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長(zhǎng)因子。

三、動(dòng)物體媒介培養(yǎng)

為提高腫瘤細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞（干細(xì)胞）的數(shù)量，可采用動(dòng)物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動(dòng)物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動(dòng)物以裸鼠最好。

1.  瘤塊接種
取新鮮瘤組織，用Hanks液洗凈血污，切成1~3 毫米小塊，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動(dòng)物腋部后，直接刺入皮下，注入瘤塊。

2.  飼養(yǎng)觀察，待腫瘤生長(zhǎng)達(dá)較大體積后，剝?nèi)〕隽鼋M織。

3.  進(jìn)行體外培養(yǎng)。

4.  為防止失敗，仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞培養(yǎng)易于成功。

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法與培養(yǎng)正常細(xì)胞完全相同，但成功率比正常細(xì)胞高。