培養(yǎng)細(xì)胞的染色實(shí)驗(yàn)-吖啶橙染色熒光觀察法
原理
吖啶橙（Acridine Oringe：AO）是一種常用熒光染料，用于直接染色觀察活細(xì)胞或固定染色觀察細(xì)胞均可。吖啶橙對(duì)DNA和RNA都能染色，快速、簡(jiǎn)便和有一定的特異性。吖啶橙對(duì)活細(xì)胞毒性小，配成2×10－4～1×10－4 可用于直接染色觀察法更好。
材料與儀器
細(xì)胞
酒精 PBS CaCl2 醋酸
步驟
1. 用蓋片單層培養(yǎng)細(xì)胞，從瓶中取出后速用溫Hanks液漂洗3~5 秒，以去除培養(yǎng)基中血清（于此步可進(jìn)行直接染色觀察活細(xì)胞）；
2. 投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分鐘，微干（蓋片邊緣接觸濾紙）；
3. 1 %醋酸作用30 秒；
4. 1×10－4 吖啶橙染30 秒或1 分鐘；
5. 0.1 M CaCl2處理30 秒~2 分鐘；
6. PBS漂洗3 次，每次數(shù)秒；
7. PBS封片，熒光顯微鏡下直接觀察并拍照。
注意事項(xiàng)
1. 觀察中應(yīng)隨時(shí)填加PBS以避免標(biāo)本干涸：如用油浸鏡觀察，需再覆以大蓋片蓋在附有細(xì)胞蓋片上（細(xì)胞面朝上），用無(wú)熒光性油浸觀察。
2. 標(biāo)本在95 %酒精中能保存數(shù)日后仍可觀察，如退色，再用AO染色。鏡下觀察，DNA呈翠綠色，RNA呈火紅色。
