細胞生長曲線
原理
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數(shù)的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數(shù)法進行。
材料與儀器
細胞
D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶
凈化工作臺 離心機 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 培養(yǎng)瓶 吸頭 槍頭 24培養(yǎng)板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計數(shù)板
步驟
1. 取生長狀態(tài)良好的細胞，采用一般傳代方法進行消化，制成細胞懸液。
2. 計數(shù)，精確地將細胞分別接種于21～30個大小一致的培養(yǎng)瓶內(nèi)或培養(yǎng)孔（以24孔培養(yǎng)板為宜），每瓶或孔細胞總數(shù)要求一致，加入培養(yǎng)液的量也要一致。
3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）細胞進行計數(shù)，計算均值。培養(yǎng)3～5 d 常要給未計數(shù)的細胞換液。
4. 以培養(yǎng)時間為橫軸，細胞數(shù)為縱軸（對數(shù)），描繪在半對數(shù)座標紙上，連接成曲線后即成該細胞的生長曲線。
注意事項
1. 細胞生長曲線雖然最為常用，但有時其反映數(shù)值不夠精確，可有20～30%的誤差，需結(jié)合其它指標進行分析。
2. 現(xiàn)在很多實驗室利用培養(yǎng)板采用MTT法進行生長曲線測定，較為簡便。
常見問題
1. 標準的細胞生長曲線近似“S”形，一般在傳代后第一天細胞數(shù)有所減少，再經(jīng)過幾天的潛伏適應期，然后進入對數(shù)生長期，達到平臺期后生長穩(wěn)定，最后到達衰老。
2. 在生長曲線上細胞數(shù)量增加1倍時間稱為細胞倍增時間，可以從曲線上換算出。
