腫瘤細胞的染色體標本制備
原理
利用腫瘤細胞無限繁殖的特點，掌握其體外生長動態(tài)，取處于對數(shù)生長期的細胞便可獲得豐富的分裂相。腫瘤細胞染色體異常包括兩個方面：1. 結(jié)構(gòu)異常 即在腫瘤細胞常出現(xiàn)的染色體畸變，包括雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體、斷裂的染色體、染色體裂隙及微小體等。2. 數(shù)目異常 由于腫瘤細胞分裂失去應(yīng)有的調(diào)控，可出現(xiàn)亞二倍體、超二倍體和多一倍體數(shù)目異常現(xiàn)象。腫瘤細胞染色體制備技術(shù)在細胞生物學、醫(yī)學遺傳學的基礎(chǔ)研究和臨床診斷、愈后觀察等方面均有廣泛用途。
材料與儀器
HL—60細胞 HeLa細胞
640培養(yǎng)液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸緩沖液 生理鹽水
超凈臺 鑷子 離心機 水浴箱 天平 離心管 顯微鏡 載玻片 平皿
步驟
1. 以1.6x 105個/ml 細胞濃度將FL-60細胞接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)。
2. 48小時后以終濃度為0.04ug/ml 的秋水仙素處理2.5小時，移入10 ml 離心管。
3. 其余步驟與淋巴細胞染色體制備相同。
4. 將長成單層的HeLa細胞按1：2傳代進行培養(yǎng)，36小時后用終濃度為0.04 ug/ml 的秋水仙素處理3小時。
5. 按時終止培養(yǎng)，用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液處理單層細胞，待細胞收縮變圓時，棄去消化液。
6. 加入少許低滲液將細胞從瓶壁洗脫，移入10 ml 離心管，加入預熱37℃的低滲液至5~6 ml，在37℃處理25分鐘。
7. 以下步驟同淋巴細胞染色體核型制備。
8. 結(jié)果：計數(shù)HeLa細胞和HL-60細胞的染色體數(shù)并尋找是否有畸變的染色體。
