HPLC-MS/MS法
材料與儀器
動(dòng)物肝臟 腎臟 肌肉 雞蛋 牛奶
乙腈 氫氧化鈉 磷酸緩沖液
雞心瓶 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 比色管 漩渦混勻器 離心管
步驟
1. 提取
動(dòng)物肝臟、腎臟、肌肉組織：稱取5.0 g己粉碎樣品于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均質(zhì)提取30 s，4000 r/min離心5 min，清液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15 + 2），洗滌均質(zhì)器刀頭10 s；用 玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質(zhì)器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min （離心機(jī)溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復(fù)用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL 至100 mL雞心瓶中。
雞蛋：稱取10.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈-水（15 + 2），均質(zhì)提取30 s，4000 r/min離心5 min，清液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗滌均質(zhì)器刀頭10 s；用玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質(zhì)器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min（離心機(jī)溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復(fù)用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL至100 mL雞心瓶中。
牛奶：稱取10.0 g樣品于50 mL離心管中，加入20.0 mL乙腈，均質(zhì)提取30 s，4000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中；另取一離心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗滌均質(zhì)器刀頭10 s；用玻棒搗碎離心管中的沉淀，加入上述洗滌均質(zhì)器刀頭溶液，在旋渦混勻器上振蕩1 min，4000 r/min離心5 min（離心機(jī)溫度20 ℃），上清液合并至50 mL比色管中，重復(fù)用10 mL乙腈-水（15 + 2）洗滌刀頭和提取一次，合并定容至50 mL，取25 mL至100 mL雞心瓶中。
雞心瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上（37 ℃水浴）蒸發(fā)至除去乙腈（易起沫樣品可加入4 mL飽和氯化鈉溶液）。
2. 凈化
立即向己除去乙腈的雞心瓶中加入25 mL磷酸鹽緩沖溶液（pH為8.5），渦旋混勻1 min，用0.1 mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為8.5，以1 mL/min的速度通過經(jīng)過預(yù)處理的固相萃取柱，先用2 mL磷酸鹽緩沖溶液淋洗2次，再用1 mL超純水淋洗。用3 mL乙腈洗脫（速度控制在1 mL/min）。將洗脫液于45 ℃下氮?dú)獯蹈桑?5 mmol/L磷酸鹽緩沖溶液（pH為7.0）定容至1 mL。過0.45 um濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
3. 測(cè)定條件
色譜柱：COSMOSILC18柱，250 mm×4.6 mm，粒度5 um；
流動(dòng)相：B組分是乙腈，A組分是0.01 mol/L乙酸銨（甲酸調(diào)pH至4.5），梯度洗脫；
流速：1.0 mL/ min；
柱溫：40 ℃；
進(jìn)樣量：10 uL。
