氣相色譜-質譜法

材料與儀器

肝 腎 肉
乙酸鈉緩沖溶液 美托洛爾 高氯酸 濃氫氧化銨溶液
離心瓶 恒溫箱 三角漏斗 水平振蕩器 固相色譜柱

步驟

1.  提取

稱?。?0 ± 0.1）g經搗碎樣品于一個100 mL離心瓶中，加入15 mL 的乙酸鈉緩沖溶液（0.2 mol/L，pH 5.2），混合2 min。添加120 ng作為內標物的美托洛爾于全部肝、腎和肉的待測樣品中。加50 uL的β-鹽酸葡萄糖酸苷酶-芳基硫酸酯酶，加蓋后超聲振蕩15 min。于恒溫箱中37 ℃培養16 h。加入10 mL 0.1 mol/L的高氯酸，混合均勻并用11.7 mol/L的高氯酸（濃）調節pH值至1 ± 0.3。以4400 r/mL離心10 min后，將上清液經過塞有少許脫酯棉花的三角漏斗過濾 至另一100 mL離心管中。用濃氫氧化銨溶液（濃度約17%）調節pH值至9.5 ± 0.3。用氯化鈉飽和水相。分別用20 mL和15 mL的異丙醇-乙酸乙酯（6 + 4）混合溶液提取，每次混合2 min，于水平振蕩器上振蕩15 min,3000 r/min離心10 min。轉移有機相至50 mL的旋轉蒸發燒瓶中，于（45 ± 5）℃蒸發有機相至干。加入12 mL的磷酸鹽緩沖溶液使蒸發殘渣成為懸浮液后，以2000 r/min離心5 min。

2.  凈化

將C18小柱（500 mg，3 mL）和SCX小柱（500 mg，3 mL）按從上到下的次序裝好。依次用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 0.03 mol/mL鹽酸溶液以一定的流速過柱活化。轉移溶液至固相色譜柱的頂部小心緩慢地抽吸固相色譜柱，此步操作至少需要10 min。用2 mL 1 mol/L的乙酸洗滌柱子到干后至少15 min，再用12 mL 甲醇在較強的負壓下洗滌柱子至干后至少10 min。取下C18小柱。用12 mL混合均勻的乙酸乙酯-氫氧化銨（97 + 3，v/v）溶液，洗脫柱子上的待分析成分。通氮氣在（40 ± 5）℃的加熱塊上蒸發洗脫液。加入200 uL甲醇，劇烈渦流搖動，溶解蒸發殘渣。將溶液轉移至反應玻璃小瓶中。再用200 uL甲醇溶解上一步未溶解完全的殘渣，溶液合并于反應玻璃小瓶中。在溫度（40 ± 5）℃的加熱塊上蒸發甲醇至干。

3.  衍生化反應

加入100 uL的N，O-雙（三甲基硅基）-三氟乙酸銨（BSTFA），并劇烈渦流搖動。將反應小瓶放置在（65 ± 5）℃的恒溫箱中加熱（30 ± 5） min。讓小瓶和加熱塊冷卻到室溫后，通一小股氮氣流蒸發至干。加入500L甲苯劇烈渦流搖動溶解蒸發殘渣。溶液進入GC-MS分析。