質粒轉化步驟
一、操作步驟:
1. 從-80℃冰箱中取出對應的感受態細胞,室溫下置于冰盒上解凍,標記;
2. 向感受態細胞中加入2μl的質粒,置于4℃冰箱中,冰浴30min;
3. 在42℃水浴鍋中熱激1min,然后立即在冰盒上放置2min;
4. 每管加900μl LB培養基,37℃搖床震蕩,150rpm×45min;
5. 取100μl 轉化液加入對應抗性的平板中,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;
6. 將平板倒置于37℃恒溫培養箱中培養過夜。
二、注意事項:
1. 感受態可用滅菌的離心管分裝使用。
2. 根據需要在第5步驟時將轉化液6000rpm離心3min,然后只留下100μl左右的上清液,混勻沉淀,全部加入相對應的平板中。
3. 轉化過程在超凈工作臺中進行。
4.質控標準:不要長太小 太密或培養時間過長,菌體大小適中 對著光看飽滿透亮,平板不要長太多衛星菌落


