RNA抽提：加入異丙醇沉淀離心后出現(xiàn)的油滴類似物

最近利用trisol（Qiagen公司）進行肝臟病理標本RNA抽提，按照試劑的說明書進行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的樣本，置于1ml的trisol中勻漿；

勻漿結束后室溫放置5min左右，加入200ul氯仿，以振蕩器劇烈震蕩15秒混勻，室溫或冰上（此處各家說法不一，我自己測試好像沒有發(fā)現(xiàn)很大差異）放置5-10min；4度，12000g離心15min，吸取上清至新的1.5ml離心管中；在上清中加入等體積（一般加500ul）的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置5-10min；

4度離心，12000g，10min；此時應該出現(xiàn)一小片白色沉淀，緊貼管壁，去掉上清；加入1ml 75％乙醇洗滌，再次12000g離心（此處標準protocol為7500g，但我們一般用12000g）10min；小心去掉上清，晾干后加入50ul的DEPC 水并水浴促溶。整個過程就是這樣。

現(xiàn)在問題是：在加入異丙醇后，原先是先出現(xiàn)乳白色的渾濁層，在顛倒混勻后，液體又回復澄清狀，而現(xiàn)在是顛倒混勻后不能回復澄清狀態(tài)，而是呈現(xiàn)乳濁液，離心后，在試管底部會發(fā)現(xiàn)看起來類似油滴狀的東西，白色或者帶點黃色，其體積跟樣本的量是成大概正比的關系。

只要出現(xiàn)了這種東西，樣本產(chǎn)生的RNA沉淀就無法貼壁，只有對著燈光，把油狀物搖散了才能夠看到里面的RNA沉淀，有時還會影響沉淀的形成，只有通過多次離心才能析出沉淀，昨天做的其中有三管離心離了三次才出沉淀，加起來有45min。這種東西乙醇清洗也不能去除，洗完后體積基本不變。

如果在加DEPC水之前，不把這種東西去除掉，跑出的膠圖像經(jīng)常是很亮的smear，或者是三條帶，在28s的上面還有一條莫名其妙的帶出現(xiàn)，而且?guī)畏浅２缓谩Ｈ绻脴尡M量把這種東西吸除干凈的話，結果并不能改善多少。試過酚氯仿重新抽提純化，結果是幾乎沒有任何的改善。

這種情況之前碰到過，當時是用新鮮小鼠肝臟做的test，在試了各種方法無效之后，更換了trisol試劑，結果立刻就理想了，當時認為是trisol過期或者變質之類的原因。但這次trisol是新近購買的，才用了三四次而已。并且是在前一天做了一次test，結果非常好，但第二天就出現(xiàn)這種情況了，可以保證在使用過程中，試劑沒有被污染。

打電話給一些公司技術支持，回答說沒有碰到類似情況，但一個同事講，他之前也碰到類似的情況，也試過酚氯仿重抽提，但沒有效果，而且后面的RT-PCR之類的后續(xù)試驗都做不出結果。總之是只要看到這種東西，整個試驗全都廢了。

想著把這種東西吸出來送到什么地方去檢測其成分，但現(xiàn)在還沒想出什么地方可以提供這種服務。這種東西應該不是普通的油烴，密度比水跟異丙醇的溶液要大，不知是否是氯仿。

現(xiàn)在想請教各位達人，是否有人碰到同樣情況，如何才能避免，如果避免不了是否有什么可以補救的處理手段。