DNA打點(diǎn)法(DNA Dot Blot)
1)膜的處理:戴上干凈手套,取出硝酸纖維膜,按需要剪成一定大小,量好各樣點(diǎn)間距離,用軟鉛筆標(biāo)記。
2)DNA變性:將DNA溶液于1×TE(pH8.0)緩沖液中或蒸餾水中,取一定量DNA樣品加于小塑料管中,在100℃沸水中煮10min,迅速入冰水中。
3)點(diǎn)樣:用塑料或硅化玻璃或微量加樣器取1~5μl變性DNA,將滴管放在硝酸纖維膜上,使DNA慢慢吸在濾膜上,點(diǎn)樣完后涼干。
4)固定:將涼干的濾膜夾在濾紙中,于80℃干烤2~3h,然后進(jìn)行雜交。
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