植物組織中酷類物質(zhì)含量的測(cè)定

簡(jiǎn)介

植物組織中的酚類物質(zhì)在多酚氧化酶的催化下被氧化為醍，醍可自動(dòng)聚合成有 色物質(zhì)，發(fā)生褐變。因此，對(duì)植物組織內(nèi)酚類物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定具有一定意義，是植物抗性生 理研究中經(jīng)常用到的一個(gè)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)的目的在于學(xué)習(xí)測(cè)定酚類物質(zhì)含量的原理及方法。

原理

酚類物質(zhì)含量測(cè)定常采用 Folin-酚法。酚類物質(zhì)在堿性條件下可與 Folin-酚試 劑中的磷鴇酸和磷鑰酸反應(yīng)生成鴇藍(lán)和鑰藍(lán)化合物，該物質(zhì)在 700 nm 處有最大光吸收，其吸 光度的大小與酚類物質(zhì)的含量成正比。因此，通過測(cè)定吸光度的大小即可測(cè)定植物組織中酚 類物質(zhì)的含量。

材料與儀器

1. 材料：各種植物組織。

2. 試劑：

(1)Folin-酚試劑：稱取鴇酸鈉 25 g 和磷鋁酸 5 g, 放入回流瓶中，加 12.5 mL 磷酸和 188 mL 蒸饞水，一起回流煮沸 2 h, 冷卻后用蒸僭水定容至 1 000 mL。

(2)10% Na2CC)3：稱取 10 g Na2CO3 溶于 100 mL 蒸儒水中。

(3) 標(biāo)準(zhǔn)酚溶液：0.45 mmol - 鄰苯二酚溶液。

3. 儀器: 分光光度計(jì)，離心機(jī)，研缽，試管，試管架，移液管等。

步驟

1 . 酚類物質(zhì)的提取：稱取 1 g 植物材料，加少量水研磨成勻漿，充分洗滌研缽，定容至 100 mL。用時(shí)可適當(dāng)稀釋。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：按表 56」加入各種試劑，混勻，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振 搖，室溫下靜置 1 h 后測(cè)定其在 700 nm 處的吸光度。以酚溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表 56-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作加樣表

3. 樣品酚含量的測(cè)定：將提取液適當(dāng)稀釋，吸取 2 mL 置于試管中，加 2 mL Folin-酚試 劑，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振搖，室溫下靜置 1 h 后測(cè)定其在 700 nm 處的吸光度，在 標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的酚濃度廠

4. 結(jié)果計(jì)算：

c X V

酚含量 (Mmol- g-,) = —

式中：c 一為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的酚濃度，卩 mol?mL 1；

V—為樣品體積,mL；

W —為樣品質(zhì)量?go

注意事項(xiàng)

酚類物質(zhì)提取時(shí)避免被氧化。

常見問題

測(cè)定植物組織中酚類物質(zhì)的含量有何意義？