熒光光度計法測定還原反應(yīng)

材料與儀器

LDH 稀釋溶液
磷酸鉀 NADH 丙酮酸
熒光光度計

步驟

實驗所需「試劑」具體見「其他」

1.98 ml 實驗混合物

0.02 ml LDH 稀釋溶液

25℃ 時，在 260 nm 激發(fā)，470 nm 處測定每分鐘熒光差異。用適當(dāng)濃度范圍的 NADH 濃度對熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定比例因子。

常見問題

試劑：

0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0

0.01 mol/l NADH（71 mg 溶于10 ml H2O 中）

0.1mol/l 丙酮酸（丙酮酸鈉，Mr＝110；110 mg溶于10 ml H2O 中）。

LDH 原料溶液（從豬心臟提取，例如 10 mg/ml，用 0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0 稀釋至 1 IU/ml）