二氫硫辛酰胺的氧化反應(yīng)

原理

此可逆反應(yīng)可以從任一方向檢測。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以購買到的，但是利用簡單的步驟就可使其還原。硫辛酸和其氨基化合物都可作為底物，有氨基存在，此酶的活性要強 5 倍。

材料與儀器

酶樣品
磷酸鉀 NAD DTE DL-二氫硫辛酰胺
分光光度計

步驟

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.96 ml 實驗混合物

0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氫硫辛酰胺 4.0 mol/L

0.02 ml 酶樣品

開始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液

30℃ 時，于 340 nm 處吸收值發(fā)生變化，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。

常見問題

試劑：

0.1 mol/L 磷酸鉀，pH7.5

0.1 mol/L NAD（游離酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L DTE（二硫赤蘚糖醇，Mr＝154.2；或二硫蘇糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.2 mol/L DL-二氫硫辛酰胺（Mr＝207.3；52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液濃度的二氫硫辛酰胺不可溶于水中，而且不可溶于酒精。存在醇脫氫酶時，例如天然的乙醇可以與 NAD 反應(yīng)形成乙醛和 NADH，因此必須排除這個酶的活性，若兩者選一，底物必須溶解于丙酮溶液中）。