測(cè)定動(dòng)物源性食品中激素殘留量實(shí)驗(yàn)

材料與儀器

動(dòng)物組織
乙酸鈉-乙酸緩沖溶液 β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液 甲醇 正己烷 水飽和乙酸乙酯
離心管 HLB固相萃取柱 液相色譜條件色譜柱

步驟

1.  前處理

稱取10 g樣品，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液（13C-己烯雌酚、13C-睪酮、13C-雌二醇）（20 ng/mL）0.5 mL，加入10 mL pH5.2的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液，勻漿后，再加入β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液10 uL，于（37±1）℃振蕩酶解過(guò)夜。取出冷卻后，加入36 mL甲醇振蕩提取30 min，轉(zhuǎn)入離心管2000 g離心10 min。上清液中加入40 mL正己烷提取兩次，棄去正己烷層。水-甲醇層中加入0.5 mL正丙醇，50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去掉甲醇。

HLB固相萃取柱（6 mL， 500 mg）用6 mL甲醇、6 mL水活化。將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后溶液中加入50 mL水，以2～3 mL/min的速度過(guò)柱，用6 mL水洗潘后，萃取柱用氮?dú)獯蹈伞Ｓ?0 mL 5  mmol/L三乙胺甲醇溶液洗脫，洗脫液氮?dú)獯蹈桑尤?.3 mL三氯甲烷溶解殘?jiān)偌尤? mL正己烷用于下一步凈化。

桂膠固相萃取柱（6 mL，500 mg）用6 mL正己烷活化，溶液過(guò)柱，用5 mL正己烷洗滌。用6 mL水飽和乙酸乙酯洗脫，洗脫液氮?dú)獯蹈桑? mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液溶解，以備過(guò)氨基柱。

氨基柱（6 mL，500  mg）用3 mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液洗滌，3 mL水飽和乙酸乙酯活化，將上步溶液過(guò)柱并接收，再加入3 mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液洗脫接收，氮?dú)獯蹈珊螅尤?.5 mL流動(dòng)相溶解上機(jī)測(cè)定。

2.  測(cè)定

（1）雄激素測(cè)定液相色譜條件色譜柱：苯基柱（2.0 × 250 mm，5 um）；流動(dòng)相：甲醇-水，梯度淋洗，初始條件為65%水-35%甲醇，保持3 min，27 min線性梯度使甲醇比例為100%，保持5 min，1 min內(nèi)甲醇比例降到35%，保持20 min到下次進(jìn)樣。流速：0.2 mL/min。

（2）雄激素測(cè)定質(zhì)譜參考條件電離源：電噴霧正離子模式；毛細(xì)管電壓：3.5 KV；錐孔電壓：70 V；射頻透鏡1電壓：30 V；射頻透鏡2電壓：0.5 V；源溫度：100 ℃；脫溶劑氣溫度：300 ℃；脫溶劑氣流量：400 L/h；電子倍增電壓：650 V；噴撞室壓力：2.8 × 10-3 mbar；

（3）雌激素測(cè)定液相條件色譜柱：苯基柱（2.0 mm × 250 mm， 5 um）；流動(dòng)相：乙腈-水，梯度淋洗，初始條件為65%水-35%乙腈，保持3 min，27 min線性梯度使乙腈比例為100%，保持5 min，1 min內(nèi)乙腈比例降到35%，保持20 min到下次進(jìn)樣。流速：0.2 mL/min

（4）雌激素測(cè)定質(zhì)譜條件電離源：電噴霧負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3.1 KV；維孔電壓：80 V；射頻透鏡1電壓：40 V；射頻透鏡2電壓：0.5V；源溫度：100 ℃；脫溶劑氣溫度：300 ℃；脫溶劑氣流量：400 L/h；電子倍增電壓：650 V；噴撞室壓力：2.8 × 10-3 mbar。