在液體培養(yǎng)基中形成孢子

材料與儀器

培養(yǎng)基

步驟

1）在合適的培養(yǎng)容器中，加入YPD培養(yǎng)基培養(yǎng)，待形成孢子的二倍體細(xì)胞生長至 OD600為 2.5?3.0 (約為 8×107 細(xì)胞/mL)。

2)轉(zhuǎn)移1 mL培養(yǎng)液至一支無菌15 mL聚丙烯試管中，1200 g離心5 min。

3)倒去上清，用5 mL無菌水重懸細(xì)胞，渦旋振蕩使細(xì)胞充分懸浮，再按步驟2離心。

4)倒去上清，細(xì)胞用1 mL添加了特定二倍體細(xì)胞所需營養(yǎng)成分的孢子形成液體培養(yǎng)基懸浮。

5）于30℃,350 r/min以上轉(zhuǎn)速培養(yǎng)2?3天，在顯微鏡下檢査孢子的形成。

如果酵母菌株難以誘導(dǎo)形成孢子，用YPA培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞。用乙酸作碳源時(shí)，酵母菌需要呼吸，而呼吸作用是孢子形成所必需的。