放線菌形態觀察實驗-扦片法
原理
將放線菌接種在瓊脂平板上,扦上滅菌蓋玻片后培養,使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上匾觀察時,輕輕取出蓋玻片。置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態下的特征,而且便于觀察不同生長期的形態。
材料與儀器
細黃鏈霉菌/青色鏈霉菌/弗氏鏈霉菌
滅菌的高氏1號瓊脂 平皿 蓋玻片 載玻片 接種環 鑷子 顯微鏡
步驟
1. 倒平板
取融化并冷至大約 50 ℃ 的高氏 1 號瓊脂約 20 ml 倒平板,凝固待用。
2. 接種
用接種環挑取菌種斜面培養物(孢子)在瓊脂平板上劃線接種。劃線要密些,以利扦片。
3. 扦片
以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約 45° 角扦入瓊脂內(扦在接種線上)(圖 IV-7),扦片數量可根據需要而定。
4. 培養
將扦片平板倒置, 28 ℃ 培養,培養時間根據觀察的目的而定,通常 3~5 d。
5. 鏡檢
用鑷子小心拔出蓋玻片,擦去背面培養物,然后將有菌的一面朝上放在載玻片上,直接鏡檢。
注意事項
觀察時宜用略暗光線:先用低倍鏡找到適當視野。再換高倍鏡觀察。如果用 0.1% 美藍對培養后的蓋玻片進行染色后觀察,效果會更好。


