食用真菌的液體培養(yǎng)

材料與儀器

側(cè)耳（ Pleurotus ostreatus 俗稱平菇、北風(fēng)菌等）
馬鈴薯培養(yǎng)基 玉米粉蔗糖培養(yǎng)基 玉米粉綜合培養(yǎng)基
旋轉(zhuǎn)式恒溫?fù)u床 接種鏟 接種針 三角瓶

步驟

1. 一種（斜面菌種，俗稱母種。母種斜面移種后稱原種）培養(yǎng)

用無(wú)菌接種鏟薄薄鏟下側(cè)耳斜面菌絲 1 塊，接種于馬鈴薯培養(yǎng)基斜面中部，26～28℃ 培養(yǎng) 7 d。 食用菌的細(xì)胞分裂僅限于菌絲頂端細(xì)胞，若用接種環(huán)刮下表面菌苔接種，因切斷薄絲，DNA 流失嚴(yán)重，大多生長(zhǎng)不好。

2. 二級(jí)種（搖瓶種子）培養(yǎng)

將上述一級(jí)種用無(wú)菌接種鏟鏟下約 0.5 cm2 的菌塊至裝有 50 ml 玉米粉蔗糖培養(yǎng)基的 250 ml 三角瓶中，26～28℃ 靜止培養(yǎng) 2 d，再置旋轉(zhuǎn)式搖床，同樣溫度，150～180 r／min，培養(yǎng) 3 d。靜止培養(yǎng)，促使鏟斷菌絲的愈合，有利于繁殖，大規(guī)模菌絲生產(chǎn)，一般都進(jìn)行二級(jí)搖瓶神子培養(yǎng)。

若系作為固體栽培的種子，則在菌絲球數(shù)量達(dá)到最高峰時(shí)（3 d 左右），放入 10 顆左右滅菌玻璃珠，適度旋轉(zhuǎn)揺動(dòng) 5 min、10 min 均質(zhì)菌絲，將這種均質(zhì)化的菌絲片斷懸液作為接種物（或用勻漿器，均質(zhì)一定時(shí)間）。取 1 ml 涂布在酵母裔麥芽汁瓊臘平板上，重復(fù) 3 份，置 28℃ 培養(yǎng) 3 d 后計(jì)算菌落數(shù)作為菌絲斷片成活試驗(yàn)。

用搖瓶種子可以直接作固體栽培種，而用均質(zhì)菌絲懸浮液作栽培種，發(fā)育點(diǎn)多、接種效果好。也可以成熟的播瓶種子接種處理好的麥粒，制成液體一麥粒栽培種，細(xì)胞年舲一致，老化菌絲少，用作栽培種，則生產(chǎn)時(shí)間縮短，污染率低，可増產(chǎn) 5％～25％。

1.3 發(fā)酵培養(yǎng)

上述搖瓶種子無(wú)雜菌污染即可分別以10％ 接神量接入 3 個(gè)玉米粉綜合培養(yǎng)基中（50 ml／250 ml 三角瓶），25～28℃ 培養(yǎng) 3～4 d。從第一天起至結(jié)束，每天取已知重量的干燥小離心管 3 個(gè)，分別重復(fù)取樣 2.0 ml，4000 r／min 10 min，棄上淸 60～62℃ 24 h 干燥稱恒重。

發(fā)酵液由稠變稀，菌絲略有自溶即應(yīng)暫停培養(yǎng)。發(fā)酵液經(jīng)過(guò)不同處理，制成備種用途。