病毒 的血清學診斷

簡介

血清學方法檢測可疑患者血清的抗體。這個方法也適用于抗體普查、疫苗效果觀察、流行病學調查及臨床感染的確定。

材料與儀器

器材：
①一次性無菌手套
②標本采集管
③棉簽拭子
④PCR儀

試劑：
①材料：待采標本
②PBS緩沖液
③瓊脂

步驟

（一）痘病毒

1．血凝抑制試驗 痘病毒中，只有正痘病毒產生血凝素。不同種正痘病毒含有相同的血凝素抗原，通常用痘苗血凝素做抗原檢測其他正痘病毒抗體。

50％ 雞紅細胞對正痘病毒血凝素呈陽性反應。因正痘病毒種間有交叉抗原，只用HAI不能做出準確診斷，需參照臨床、流行病學資料確診。血凝抑制抗體是感染后最早出現的抗體。天花和猴痘的抗體在感染后4～7天內出現，第2周達到高峰，效價一般在1：80以上，少數可超過1：1000。

2．中和試驗 正痘病毒的中和試驗可在培養的細胞或雞胚絨毛尿囊膜（CAM）上進行；副痘病毒和塔那痘病毒只能在培養的細胞中進行抗體檢測。中和試驗不適用于雅巴及傳染性軟疣病毒抗體的常規檢測。

（二）皰疹病毒

檢測HSV特異性抗體的血清學檢測在臨床上應用不十分廣泛，可能與HSV在自然界中感染非常普遍，絕大多數人體內已存在病毒抗體；還可能與HSV-1和HSV-2存在50％ 的基因同源性，兩型病毒存在交叉抗原性，因此，兩型抗體均能與另一型病毒發生交叉反應有關。一般只用做回顧性或記錄性調查。

（三）人乳頭瘤病毒

由于不易得到大量的人乳頭瘤病毒抗原，阻礙了血清學診斷的研究和應用。以下的各種方法各有利弊：

1．從皮膚疣組織中提取病毒抗原檢測血清中的抗體，因提取的病毒抗原量不多，限制了其臨床應用。
2．人工合成的病毒蛋白表位為抗原的多肽ELISA，由于合成的線性表位，不能完全代表構象特點，臨床應用價值不大。
3．以細菌表達融合蛋白為抗原的蛋白印跡法，但陽性率很不一致。
4．以體外轉錄和轉譯的病毒蛋白為抗原的放射免疫沉淀法（TT-RIRA），由于放射沉淀法較為復雜，不宜推廣應用。
5．人乳頭瘤病毒結構蛋白L1自身形成的VLP為抗原的VLP-ELISA。L1-VLP是以痘苗病毒、桿狀病毒為L1基因載體，在真核細胞或昆蟲細胞中表達產生的，VLP代表了病毒顆粒的空間構象。

（四）新型皰疹病毒的實驗室診斷

1.人皰疹病毒6型常用新鮮制備的正常人臍血或外周血淋巴細胞、人T細胞株JJHan和Molt分離培養。新鮮制備的人臍血或外周血淋巴細胞經PHA刺激后對各種人皰疹病毒6型分離物易感，感染細胞一般在接種后2～4天即出現病變。

2.用于病毒分離的樣本多為血淋巴細胞、器官組織、唾液、氣管分泌物等。血清學特異性診斷多采用間接免疫熒光法。PCR是常用的人皰疹病毒6型DNA檢測手段。

3.人皰疹病毒7型用外周血和臍血淋巴細胞或T細胞株SUP-T1分離培養。血清學診斷用免疫熒光法。PCR一般用巢式PCR。

4.人皰疹病毒8型DNA特異性診斷方法為PCR。若需進一步證明PCR產物的特異性，可將產物做核酸雜交進行鑒定。