人類免疫缺陷病毒分離和鑒定

簡介

HIV-1 分離培養(yǎng)的意義：HIV 抗體不確定或 HIV-1 陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷；HIV 表型耐藥檢測及其他 HIV 生物學(xué)特征研究；HIV 感染的輔助診斷 HIV 感染窗口期。細(xì)胞培養(yǎng)與血清學(xué)方法相比，專一性很強(qiáng)，不會出現(xiàn)假陽性。但其敏感性不如血清學(xué)和分子生物學(xué)，因?yàn)楸仨氂幸欢〝?shù)量的感染細(xì)胞存在才能培養(yǎng)出病毒來。細(xì)胞培養(yǎng)方法的最大好處是能得到最原始的臨床毒株，其重要意義在于確認(rèn)對 WB 不確定的疑似感染者及母嬰傳播、嬰幼兒 HIV 感染者。毒株可供藥物篩選、耐藥性及其生物學(xué)特性等研究。

原理

人類免疫缺陷病毒分離和鑒定的基本原理是細(xì)胞培養(yǎng)與血清學(xué)方法相比，專一性很強(qiáng)，不會出現(xiàn)假陽性。但其敏感性不如血清學(xué)和分子生物學(xué)，因?yàn)楸仨氂幸欢〝?shù)量的感染細(xì)胞存在才能培養(yǎng)出病毒來。

材料與儀器

器材：HIV陰性者外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）、傳代淋巴細(xì)胞系。

步驟

人類免疫缺陷病毒分離和鑒定的基本過程可分為如下幾步：

A 一般采用 HIV 陰性者外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）與受檢者標(biāo)本（PBMC、全血、血漿、精液及其他體液）共培養(yǎng)的方法，最常用的方法是 PBMC 共培養(yǎng)，適當(dāng)周期培養(yǎng)后測定培養(yǎng)液 HIV p24 抗原或反轉(zhuǎn)錄酶（RT），進(jìn)而判斷患者的淋巴細(xì)胞是否受到 HIV 感染。

B 也可用傳代淋巴細(xì)胞系如 HT-H9、Molt-4、CEM 細(xì)胞來做分離及傳代。培養(yǎng) 2~4 周后，如出現(xiàn)不同程度細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），則說明有病毒增殖，特征性的細(xì)胞病變是有融合的多核巨細(xì)胞。

C 無論是否出現(xiàn) CPE，都需要再用免疫學(xué)方法檢測 HIV p24 抗原，或用生化方法測定培養(yǎng)液中反轉(zhuǎn)錄酶的活性，也可用電鏡檢測 HIV 顆粒進(jìn)行鑒定，確定患者標(biāo)本中是否有 HIV。