懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的融合

材料與儀器

細(xì)胞
PEG1000
離心管

步驟

1. 從無(wú)血清培養(yǎng)基中沉淀雜交前體細(xì)胞。

2. 倒盡上清。

3. 用手指彈撥管底或雙手搓轉(zhuǎn)離心管，使細(xì)胞重新懸浮。

4. 加入 1 ml PEG1000，待 2 分鐘。

5. 加入 5 ml 含 10% FBS 的培養(yǎng)基稀釋 PEG。于室溫，200 g 離心 5 分鐘沉淀細(xì)胞。

6. 加 5 ml 含 10% FBS 的培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)離心管重懸細(xì)胞，盡量不要打碎細(xì)胞，按步驟 5 重新沉淀細(xì)胞。

7. 最后一次以適量生長(zhǎng)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，24~48 小時(shí)后加入選擇培養(yǎng)基。

8. 篩選細(xì)胞：融合 12~24 小時(shí)后就可以進(jìn)行異核體分析。