懸浮細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的接種

原理

淋巴樣細(xì)胞通常呈懸浮狀生長(zhǎng)。常用的培養(yǎng)液為含 10%~15%FBS 的 RPMI1640 各種細(xì)胞系間最佳接種密度和平臺(tái)期細(xì)胞密度各不相同。當(dāng)培養(yǎng)一種新的細(xì)胞系時(shí)其最佳原則為按 1:2 和 1:4 的比例傳代細(xì)胞，在 3~4 天時(shí)間內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)以計(jì)算每毫升細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞在傳代后 24~36 小時(shí)細(xì)胞數(shù)會(huì)翻倍。傳代細(xì)胞密度太低，細(xì)胞容易死亡，反映出細(xì)胞在達(dá)到增長(zhǎng)前有較長(zhǎng)滯留期。一旦細(xì)胞適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件冉?jīng)Q定備細(xì)胞株的最佳接種密度。細(xì)胞每毫升接種數(shù)量可從 5x10 4 ~8x105 不等培養(yǎng)液 PH 下降呈現(xiàn)黃色，表明細(xì)胞已達(dá)到最大密度需要進(jìn)行換液或傳代培養(yǎng)。 

懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代一般只需簡(jiǎn)單稀釋操作即可，若需完全更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸于合適的培養(yǎng)液中即可。

材料與儀器

淋巴樣細(xì)胞
含 10%~15%FBS 的 RPMI1640培養(yǎng)液
細(xì)胞培養(yǎng)瓶

步驟

1、 如果細(xì)胞未在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)，只需搖晃、刮取或胰蛋白酶處埋（見下文“胰蛋白酶處理分離細(xì)胞”）即可將細(xì)胞從細(xì)胞瓶表面分離下來(lái)。

2、輕輕地吹打細(xì)胞（移液管上下吹打），將細(xì)胞團(tuán)吹散。

3、取1ml 細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，勿讓細(xì)胞沉積在瓶底。輕輕來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)。

4、稀釋細(xì)胞，使其終濃度約為每毫升 2x105~4x105。

5、進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)，操作方案見下文“細(xì)胞計(jì)數(shù)”。

注意事項(xiàng)

注意無(wú)菌操作，操作前用酒精擦拭雙手。

常見問(wèn)題

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：繁殖速度快、可以培養(yǎng)出齡期均一的細(xì)胞集團(tuán)。

來(lái)源《細(xì)胞實(shí)驗(yàn)指南（上冊(cè))》作者：黃培堂。