加支持物培養(yǎng)法

原理

加支持物培養(yǎng)法是預(yù)先向培養(yǎng)容器中加入各種可使細(xì)胞貼附的支持物，進(jìn)行培養(yǎng)的方法。

待細(xì)胞貼附于支持物生長(zhǎng)增殖后，可進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)和觀察。觀察時(shí)可把支持物從瓶中抽出，能做各種技術(shù)處理，是研究工作中常用的方法之一。

各種對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性的如玻璃、塑料、雞卵殼膜、膠原、硅橡膠、袋泡茶包裝紙等，均可做支持物用。

材料與儀器

水 酒精
蓋玻片 培養(yǎng)瓶 玻璃 薄膜

步驟

1.  支持物制備

（1）特制有機(jī)玻璃、特氟隆薄膜、玻璃等

其中以玻璃片和特氟隆薄膜最為多用。前者便于做各種固定、染色處理和觀察；后者最適做電鏡技術(shù)，允許做包埋和切片。

（2）加支持物培養(yǎng)法程序與一般培養(yǎng)法相同，只是在培養(yǎng)前需在培養(yǎng)瓶中加入已經(jīng)消毒的支持物。特氟隆薄膜為定型菌包裝產(chǎn)品，用時(shí)無(wú)菌條件下啟封，用剪刀按需要剪成各種不同大小的塊，于培養(yǎng)接種細(xì)胞前，先置入培養(yǎng)容器中即可。

（3）通常多用蓋玻片做支持物，用前先要把蓋片用玻璃刀切成一定形態(tài)，以便裝入培養(yǎng)瓶中，然后按如下順序處理
自來(lái)水浸泡24 小時(shí)→96 %酒精30~60 分鐘→蒸餾水浸泡30~60 分鐘→用干凈軟布擦拭干凈（擦?xí)r應(yīng)戴白手套工作）→裝入培養(yǎng)器皿中→高壓或干熱滅菌備用。

2.  培養(yǎng)法

初代消化培養(yǎng)、初代組織塊培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)等皆可應(yīng)用加支持物培養(yǎng)法。接種細(xì)胞后，可在任何進(jìn)間取出支持物，做各種觀察或?qū)嶒?yàn)。支持物培養(yǎng)法中最重要的是支持物一定要處理干凈，不殘留任何對(duì)細(xì)胞有害成分，以免不利細(xì)胞貼附和生長(zhǎng)增殖。