星形膠質細胞培養基無血清ACM-SF的培養方法研究
一、背景及概述
星形膠質細胞是中樞神經系統中含量最豐富的細胞。星形膠質細胞具有多種生物學功能，如支持參與血腦屏障形成的內皮細胞，為神經元提供營養，維持細胞外離子平衡，促進中樞神經系統的修復。星形膠質細胞培養基-無血清 ACM-SF已廣泛應用于培養神經元和內皮細胞。
二、培養方法研究
徐立新等人探索應用無血清培養基進行大鼠星形膠質細胞原代培養及傳代培養的方法。
方法：取出生24 h內Wistar大鼠大腦皮質組織,機械吹打分散為單細胞后在無血清培養基中進行原代培養。細胞傳代時分別使用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶或胰酶作為消化液,濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTL)終止消化作用,按照1:2或1:3的比例傳代。
顯微鏡下觀察細胞生長狀態,膠質纖維酸性蛋白(GFAP)細胞免疫熒光染色方法鑒定細胞表型,MTT法檢測傳代細胞增殖情況。結果：細胞懸液靜置15 min后更換新的無血清培養基培養,7 d后顯微鏡下可見細胞生長良好,折光性強,胞體小而突起長;細胞免疫熒光染色鑒定顯示>95%的細胞為GFAP陽性細胞。
與應用SBTI終止胰酶反應時未進行離心比較,低溫、低速離心(4℃、3 000×g)3 min后,傳代細胞可在無血清培養基中生長正常并增殖。MTT檢測結果顯示,EDTA-胰酶消化效果優于胰酶(A值分別為0.290±0.007、0.270±0.006,P<0.010);使用濃度為0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI終止消化(A值分別為0.290±0.013、0.290±0.017,P=0.820)及以1:2或1:3比例傳代(A值分別為0.340±0.070、0.320±0.030,P=0.770),傳代星形膠質細胞數量的差異均無統計學意義。
結論：本研究建立無血清培養基進行大鼠星形膠質細胞原代及傳代培養的方法,為避免血清干擾更好地開展體外星形膠質細胞功能的研究提供了新的細胞模型。
