人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒的應(yīng)用
一、背景
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）的檢測工具，用于測定血清、血漿和其他相關(guān)生物流體中Aβ1-42的濃度。
二、人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒的工作原理主要包括以下步驟
使用純化的人β淀粉樣蛋白1-42抗體包被微孔板，制成固相抗體。
向預(yù)先包被了抗人β淀粉樣蛋白1-42抗體的酶標(biāo)孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，溫育后，再加入生物素標(biāo)記的抗β淀粉樣蛋白1-42抗體（或HRP標(biāo)記的Aβ1-42抗體），形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。
經(jīng)過徹底洗滌后，加入底物TMB進(jìn)行顯色。TMB在酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）呈正相關(guān)。使用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中Aβ1-42的濃度。
三、人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
3、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液）100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6、依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7、依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8、用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
四、在使用人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒時，需要注意以下事項(xiàng)
嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。
樣本的收集和保存應(yīng)遵循適當(dāng)?shù)姆椒ǎ苊馊苎⒏哐纫蛩貙?shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
試劑的保存和使用應(yīng)遵守相應(yīng)的規(guī)定，避免試劑的污染和失效。
實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意安全，避免直接接觸有毒或有害的試劑。
五、應(yīng)用
人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒可以用于冠心病患者SYNTAX評分與人β淀粉樣蛋白1-42的相關(guān)性臨床研究：
探索臨床冠心病患者SYNTAX評分與人β淀粉樣蛋白1-42的相關(guān)性。
方法：對我院2019年11月至2020年12月就診的129例同時完成冠狀動脈造影(Coronary Angiogram,CAG)和人β淀粉樣蛋白1-42(Amyloid-β1-42,Aβ1-42)抽血人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa試劑盒檢查的患者進(jìn)行回顧性分析。根據(jù)查看CAG圖像的結(jié)果,對這129例冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)患者進(jìn)行SYNTAX評分(SYNTAX Score),SYNTAX評分由SYNTAX官方網(wǎng)站上的計算器計算所得。首先確定后降支血管的來源,從而區(qū)分左右優(yōu)勢冠脈;其次,對心臟冠狀動脈系統(tǒng)的主要分支病變進(jìn)行加權(quán)計算得分,并在有分叉、鈣化、血栓形成、彌漫性病變等特殊病變時進(jìn)行額外的加分,根據(jù)得分,將其分為SYNTAX評分低分組(0-22分)、SYNTAX評分中分組(23-32分)、SYNTAX評分高分組(≥33分)。分組結(jié)果為低分組共44例(男34例、女10例);中分組共48例(男30例、女18例);高分組共37例(男32例、女5例)。采用統(tǒng)計軟件SPSS 25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析,對SYNTAX低、中、高三組間的Aβ1-42、其它臨床生化指標(biāo)及基線資料的情況進(jìn)行分析比較。
