細(xì)胞的纖毛和鞭毛

原理

暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進(jìn)入物鏡的照明方法。常常用它來觀察沒有染色的活體細(xì)胞或膠體粒子。利用此照明法，在鏡檢時(shí)不能直接看到通過標(biāo)本的照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進(jìn)入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運(yùn)動，但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚。

材料與儀器

小白鼠
臺盼蘭 剛果紅
光鏡 注射器 載玻片 蓋玻片 解剖器材 滴管 移液管 試管 玻璃片

步驟

一、自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。

步驟：

1.  將顯微鏡聚光器調(diào)到最高位，用低倍鏡調(diào)焦至清楚。

2.  取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。

3.  放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。

4.  按照圖1的形狀，用黑紙剪成與調(diào)節(jié)后光圈孔徑一樣大小的中央遮光板。

5.  將中央遮光板放置在顯微鏡的濾光框上，即可進(jìn)行標(biāo)本的暗視野觀察。

注：如果使用高倍鏡觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按高倍鏡調(diào)焦的視野大小重新制作中央遮光板。

圖1中央遮光板
a.  光圈孔徑
b.  濾光片直徑

二、觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細(xì)胞的纖毛運(yùn)動

步驟：

1.  用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。

2.  腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤上。

3.  沿蟾蜍二側(cè)口角向后剪開約1厘米，將下頜翻轉(zhuǎn)固定在腹部。

4.  在上頜中線距喉頭1厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動，記錄臘屑開始移動到消失的時(shí)間（見圖2蟾蜍口腔內(nèi)面圖）。

5.  然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約2×2 cm2 小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜，將縱切面貼于載片上。

6.  加一滴生理鹽水于載玻片標(biāo)本上，加蓋玻片，鏡檢。

圖2    蟾蜍口腔內(nèi)面圖

7.  結(jié)果：

（1）在低倍鏡下觀察上頜粘膜細(xì)胞纖毛運(yùn)動的現(xiàn)象。

（2）換高倍鏡仔細(xì)觀察纖毛有規(guī)律的運(yùn)動。

三、暗視野觀察蟾蜍精子的鞭毛運(yùn)動

步驟：

1.  將前面實(shí)驗(yàn)所用蟾蜍沿腹中線開腹，暴露出黃色圓柱狀精巢。

2.  剪取一側(cè)精巢于盛有自來水的平皿中，用鑷子夾住精巢的一端，清洗去血污。

3.  移取洗凈的精巢于另一干凈的平皿上，用眼科剪將精巢充分剪碎后，加入數(shù)滴自來水混勻。

4.  用吸管吸取平皿內(nèi)液體，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，稍待2~3分鐘于鏡下觀察。

5.  結(jié)果：

（1）在低倍鏡下可見到視野中有許多精子：頭部呈長錐形，尾為細(xì)長的線狀結(jié)構(gòu)。

（2）置高倍鏡下觀察：可見有許多靠尾部鞭毛彎曲擺動驅(qū)使而運(yùn)動的精子，測量鞭毛長度。