Brachet反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA和RNA

簡(jiǎn)介

Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 是利用了 DNA 和 RNA 這種結(jié)構(gòu)上的差異，采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。

原理

Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 的基本原理是利用了 DNA 和 RNA 這種結(jié)構(gòu)上的差異，采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。甲基綠、派洛寧（methyl green，pyronin）為帶有正電荷的堿性染料（結(jié)構(gòu)式見圖3-2），可與帶有負(fù)電荷的核酸分子結(jié)合，兩種染料的作用具有選擇性，甲基綠帶有2 個(gè) 正電荷，易與雙鏈的 DNA 分子結(jié)合，使其顯示藍(lán)綠色；派洛寧帶有1 個(gè) 正電荷，易與單鏈的 RNA 分子結(jié)合，使其顯示紅色。也有人認(rèn)為其染色原理與 DNA 和 RNA 分子的不同聚合程度有關(guān)。細(xì)胞經(jīng)甲基綠-派洛寧混合液處理后，其 DNA 和 RNA 出現(xiàn)不同的顯色反應(yīng)，以此可對(duì)細(xì)胞中的DNA、RNA進(jìn)行定位、定性和定量分析。

材料與儀器

器材：

尖頭鑷子、染色缸、蓋片、載玻片、吸管、吸水濾紙、普通光學(xué)顯微鏡、CO2 培養(yǎng)箱、 HeLa 人宮頸癌上皮細(xì)胞。

試劑：

①0.01 mol ／L PBS（pH 7.2）（36 mL 0.2 mol ／ L 磷酸氫二鈉液14 mL 0.2 mol ／L 磷酸二氫鈉液加雙蒸水至1000 mL 。混勻，待完全溶解分裝，經(jīng)高壓滅菌后保存于4 ℃ 冰箱備用。）

②Carnoy 固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1）

③甲基綠-派洛寧混合液

④蒸餾水

⑤丙酮

⑥二甲苯

⑦中性樹膠

步驟

Brachet 反應(yīng)顯示細(xì)胞中 DNA 和 RNA 的基本過程可分為如下幾步：

A.將培養(yǎng)的 HeLa 細(xì)胞接種于蓋片，24～48 h 后生長(zhǎng)為單層。

B.取細(xì)胞蓋片1 張 ，用 PBS（pH7.2）漂洗3 次 ，吸水濾紙吸去液體。

C.放入 Carnoy 固定液中固定30 min 。

D.向蓋片滴加甲基綠-派洛寧混合液，染色30 min 。

E.蒸餾水輕輕漂洗2～3 次 （每次2～3 s ），濾紙吸去多余水分。

F.蓋片浸入丙酮中分色2～3 s 。

G.浸入丙酮-二甲苯（1:1）中5 s 。

H.浸入純二甲苯中透明5 min 。

I.滴1 滴 中性樹膠于載玻片上，將蓋片細(xì)胞面朝下封片。

J.鏡下觀察