Hoechst 染色實(shí)驗(yàn)
材料與儀器
Hoechst染料 二甲基亞砜染料 二苯亞胺 甲基水楊酸
熒光顯微鏡 水浴鍋 烘箱 培養(yǎng)箱
步驟
1. 用水按1：500稀釋1 mg/ml 的Hoechst 染液至終濃度2 μg/ml。將稀釋染液加于切片上或?qū)⒉Ｆ谌疽褐?，置室? min。
2. 室溫下，在水中洗2 min，晾干。
3. 在42℃至55℃烘箱中，烘烤玻片30~60 min，取出置室溫。
4. 用0.5 g/ml 加拿大香柏油為介質(zhì)，加上蓋玻片，將玻片置室溫干燥2天。
5. 用Hoechst 落射熒光鏡頭觀察細(xì)胞核，用紅色濾光片蓋住光源并同時(shí)以暗視場(chǎng)觀察銀粒。銀粒將顯示紅色且與顯示藍(lán)色熒光的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。如欲照像，可對(duì)細(xì)胞核和銀色的顆粒進(jìn)行二次曝光。
注意事項(xiàng)
1. 勿用Permaunt，因在觀察細(xì)胞核時(shí)會(huì)出現(xiàn)自發(fā)突光，加拿大香柏油能很好地顯現(xiàn)石蠟切片并在紫外照射下不發(fā)熒光，Gelvatol 可用于冰凍切片，但不應(yīng)用于石蠟切片，因其不能顯現(xiàn)組織成分。
