雜交信號(hào)的放大

材料與儀器

載有樣本的載玻片
1?3μg ml生物素酰化抗親和素抗體 溶于4×SSC 1% (m V) BSA (組分 V) 生物素信號(hào)放大溶液：含2?5μg ml熒光素親和素DCS 溶于 4×SSC 1% (m V) BSA (組分V)
廣口瓶 載玻片 濕盒

步驟

1) 用生物素酰化探針與切片進(jìn)行雜交、洗滌，進(jìn)行第一輪雜交信號(hào)檢測(cè)。

對(duì)生物素酰化探針信號(hào)的放大，可在基本方案步驟8之后的任何一步進(jìn)行。

2) 如果切片已加蓋玻片并密封，可用一針頭或解剖刀片劃開(kāi)密封的指甲油，移去蓋玻片，并除去載玻片上指甲油。將玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的，以鋁箔包裹的Coplin廣口瓶15 min,輕輕搖動(dòng)。如蓋玻片不易松動(dòng)，應(yīng)小心抬起，重復(fù)洗滌2次。

3) 吸去載玻片上殘余溶液，在載玻片上加 50μL的1?3μg/ml生物素酰化抗親和素抗體，蓋以22 mm2大小的Parafilm 膜，置加濕盒中，濕盒外裹以鋁箔，放 37℃溫育 30 min。

4) 取掉Parafilm 膜，在 0.1% Triton ×-100/4 × SSC中輕搖洗滌15 min。

5) 吸去玻片上殘液，加50μL生物素信號(hào)放大溶液，蓋以Parafilm膜。放在裹以鋁箔的加濕盒中，于37℃溫育30 min。

6) 移去Parafilm 膜，并以 0.1% Triton×-100/4×SSC 洗滌 15 min。然后以 4×SSC洗滌15 min,洗滌時(shí)應(yīng)輕輕搖動(dòng)。可進(jìn)行親和素-熒光素和生物素酰化抗親和素抗體的多層反應(yīng)，但將會(huì)明顯地增加本底。

7) 復(fù)染，固定并在顯微鏡下觀察