分光光度法
原理
PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410nm處使反應體系的OD值產生變化，通過OD值上升的讀數變化確定PPO的酶活大小。
材料與儀器
多酚氧化酶粗酶液
鄰苯二酚溶液 檸檬酸緩沖液 鄰酸二氫鈉 硫酸銨沉淀組分 DE-52洗脫組分 葡聚糖凝膠洗脫組分
試管 恒溫水浴 分光光度計
步驟
在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液試管中加入0.05ml0.05M鄰苯二酚溶液，在30℃恒溫水浴中預熱后加入0.05ml酶液，反應5分鐘，在分光光度計410nm處讀取吸光值。在上述條件下，以A410讀數，以每分鐘增加0.01O.D.值定義為一個酶活性單位（U）。
注意事項
1.反應混合液必須現配現用，否則會因鄰苯二酚自動氧化而失效；
2.加樣時，先加緩沖溶液，再加底物鄰苯二酚，搖勻，在測量之前最后加酶提取液。
3.在試驗中加入一種酚結合劑--聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），它能與酚類化合物強烈地發生締合作用，從而消去酶反應體系中的底物，使?PPO活性的測定更接近其真值
常見問題
PPO與抗病性的關系人們已進行了廣泛的研究。植物在抵御病原微生物的侵染過程中，抗性相關酶發揮了重要作用，這主要包括了酚類代謝系統中的一些酶和病原相關蛋白家族PPO通過催化木質素及醌類化合物形成，構成保護性屏蔽而使細胞免受病菌的侵害，也可以通過形成醌類物質直接發揮抗病作用。由于自然界中存在著大量結構不同的多酚類物質，而催化這些酚類物質氧化的多酚氧化酶也是不同的。如果從微生物中篩選出有效的酶源或者利用酶修飾、基因異源表達和基因工程菌的構建等技術創造出有效的微生物酶源，這將著深遠意義。
