吡哌酸的含量測定

本品為8-乙基-5-氧代-5,8-二氫-2-(1-哌嗪基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸三水合物，按無水物計算，含C14H17N5O3不得少于98.5%。

一、性狀

本品為微黃色至黃色的結(jié)晶性粉末，無臭。

本品在甲醇中微溶，在水中極微溶解，在乙醇或乙醚中不溶，在冰醋酸或氫氧化鈉試液中易溶。

1、取本品與吡哌酸對照品各適量，分別加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液，作為供試品溶液與對照品溶液。照有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的色譜條件測定，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。

2、取本品，加0.01mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1mL中約含3μg的溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401）測定，在275nm的波長處有最大吸收。

3、本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集189圖）一致。

取本品0.50g，加氫氧化鈉試液10mL溶解后，溶液應(yīng)澄清（通則0902）。

照高效液相色譜法（通則0512）測定。

供試品溶液：取本品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含0.3mg的溶液。

對照溶液：精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋制成每1mL中含0.6μg的溶液。

系統(tǒng)適用性溶液：取吡哌酸適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含0.3mg的溶液，置敞口玻璃容器中，在紫外光下5cm處照射3小時（30W）或6小時（15W），得吡哌酸與其降解雜質(zhì)的混合溶液（其中與主峰相對保留時間0.8和1.2處雜質(zhì)的量不少于0.2%）。

靈敏度溶液：精密量取對照溶液適量，用流動相定量稀釋制成每1mL中含0.06μg的溶液。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以枸櫞酸癸烷磺酸鈉溶液（取枸櫞酸5.7g、癸烷磺酸鈉1.7g，加水溶解并稀釋至1000mL）-乙腈-甲醇（60:20:20）為流動相，檢測波長為275nm，進(jìn)樣體積20μL。

系統(tǒng)適用性要求：系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，吡哌酸峰的保留時間約為18分鐘，吡哌酸酸峰與其相對保留時間0.8和1.2處雜質(zhì)峰間的分離度應(yīng)分別大于4.5和3.5。靈敏度溶液色譜圖中，主成分峰峰高的信噪比應(yīng)大于10。

測定法：精密量取供試品溶液與對照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。

限度：供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（0.2%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的5倍（1.0%），小于對照溶液主峰面積0.25倍的峰忽略不計。

取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量應(yīng)為15.0%～16.0%（通則0831）。

取本品1.0g，置鉑坩堝中，依法檢查（通則0841），遺留殘?jiān)坏眠^0.2%。

取本品1.0g，置鉑金坩堝中，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5mL～1.0mL，使恰濕潤，低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500℃～600℃熾灼使完全炭化，依法檢查（通則0821第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。

取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸20mL溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于30.33mg的C14H17N5O3。