熒光測(cè)定法2

原理

核黃素在pH 4～9 的條件下，用450 nm波長(zhǎng)的光激發(fā)，可發(fā)出波長(zhǎng)為520 nm的熒光。在核黃素的含量為0.1～10 μg范圍內(nèi)，熒光的強(qiáng)度，與核黃素濃度成正比，硫代硫酸鈉可消除核黃素的熒光性。

材料與儀器

核黃素
熒光紅鈉 硫代硫酸鈉 鹽酸
熒光分光光度計(jì) 容量瓶

步驟

溶液配制：
1. 標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液：1.0 μg/ml。
2. 樣品液：含核黃素0.01～10 μg/ml。
3. 熒光紅鈉溶液：5 μg/ml。
4. 熒光消光劑：0.2 g硫代硫酸鈉,加水溶解至10 ml。
操作步驟：
1. 儀器定位：在每次測(cè)定前，均需用熒光紅鈉溶液作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)熒光分光光度計(jì)定位。調(diào)好激發(fā)波長(zhǎng)450 nm，熒光波長(zhǎng)520 nm。調(diào)好熒光強(qiáng)度為100。
2. 標(biāo)準(zhǔn)核黃素?zé)晒鉁y(cè)定：吸取樣品液10 ml，加入標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液1 ml，用0.1 mol/L鹽酸調(diào)至pH 5.0，測(cè)定熒光強(qiáng)度為A。
3. 樣品熒光強(qiáng)度測(cè)定：各吸取10 ml樣品液于試管中，分別加入1 ml蒸餾水和1 ml消光劑溶液。用0.1 mol/L鹽酸調(diào)至pH 5.0，于熒光光度計(jì)中測(cè)定各自的熒光強(qiáng)度。加水者為B，加消光劑者為C。
4 . 計(jì)算