總RNA的提取方法
具體步驟：（關鍵是防止RNA酶的污染）
⑴
1) 稱取-85℃冰凍保存的標本50-100mg，于液氮中夾碎(用剪刀將組織塊剪成若干碎塊)(須避免RNA酶的污染)。
2) 將組織碎塊加入1ml TRI zol變性緩沖液中(所加組織塊的體積不能超過TRIzol體積的10%)，在玻璃勻漿器中充分研磨至無明顯大的組織塊為止，研磨過程在0℃冰水中進行，以防止組織RNA被降解。
⑵ RNA的分離
3) 然后將組織勻漿液轉移到1.5ml的Eppendorf管中，室溫靜置5min，使核蛋白復合體完全分離。
4) 加入0.2ml的氯仿，蓋緊蓋子，充分搖勻15秒左右，配平，室溫靜置2-3min 。
5) 4℃冰凍離心機中離心(12000g/min，15min)。此時可見液體分層：底層——紅色酚-氯仿相；中間層——粉紅色的交界相；上層——無色液相（RNA全部在此相中）。
⑶ RNA的沉淀
6) RNA僅存于上清中。將上清轉移至新管（1.5ml的Eppendorf管）中(切勿將中間層誤吸入)，
7) 加入0.5ml的異丙醇，充分混勻，配平，室溫靜置10min。
8) 4℃冰凍離心機中離心(12000g/min，15min)。
9) 棄上清(動作輕，慢)，在管底部可見一乳白色小沉淀物，即為RNA。
⑷ RNA的清洗
10) 加入1ml 75%乙醇，混合震蕩，（可在2℃-8℃中保存一周，－15－25℃中保存一年）
11) 4℃冰凍離心機中離心(7500g/min) 5min，棄上清。
⑸ RNA的再溶解
12) 通風，室溫中干燥5min-10min，讓乙醇揮發（根據肉眼觀察管內水分情況，不能太干，RNA干后難溶解）。
13) 加入10ul的0.1%的DEPC處理水溶解RNA。
14) 供下一步實驗使用或-70℃凍存。
RNA完整性的檢測（應用檢測DNA完整性的方法進行）：
1) 電泳槽的處理：
做RNA電泳時先用肥皂水洗凈，無水乙醇沖洗，自然干燥后用3%雙氧水浸泡15分鐘，再用DEPC處理水沖洗即可。
做DNA電泳時，先用肥皂水洗凈，無水乙醇沖洗，自然干燥后即可使用。
2) 配置50*TAE緩沖液
50×TAE配方:
Tris 24.2 g
冰乙酸 5.71 mL
0.5mol/L EDTA (pH8.0) 10mL -------1.861 g--------NaOH調節PH值到8.0 分子量372.24*0.5*0.01＝1.861 g
加DEPC處理水 加至1 00mL 應用時用DEPC處理水稀釋50倍使用
3)制備凝膠（1%瓊脂糖凝膠）
稱取瓊脂糖300/500mg，加入1×TAE 30/50ml中，微波爐加熱至融化（中火1分鐘），冷卻至60℃，加入EB嗅已啶（10mg/ml）1.5 /1.8ul,混勻，倒入電泳槽中，室溫30分鐘以上至凝固，最終配成濃度為1%瓊脂糖凝膠。
4)加2 μl 滅菌的并經用DEPC處理的加樣緩沖液于10μLRNA樣品中，混勻后加樣于1%瓊脂糖凝膠加樣孔中。
加樣緩沖液配方：
50％甘油 5ml
1 mmol/L EDTA(PH值8.0) 20ul
0.25%溴酚藍 25mg
0.25%二甲苯青FF 25mg
5) 在1%的瓊脂糖凝膠上進行水平電泳，電壓5V/cm,電泳時間約40分鐘。
6)在可見/紫外線檢測儀254nm紫外光透視下，對結果進行觀察。應可見真核細胞核糖體RNA中的28s 和18s RNA 兩條清晰條帶。所得結果用相機拍攝存檔。
