核酸雜交技術(Southern Blot、Northern Blot )
(一)Southern Blot
原理:
將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后,通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離,繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上,固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列,則二者通過堿基互補的原理進行結合,游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術進行檢測,從而顯示出待檢的片段及其相對大小。
用途:檢測樣品中的DNA及其含量,了解基因的狀態, 如是否有點突變、擴增重排等。
(二)Northern Blot
原理:在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳,繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。
用途:檢測樣品中是否含有基因的轉錄產物(mRNA)及其含量。
(三)探針標記技術
1 標記物:放射性和非放射性兩種
放射性:
非放射性: 生物 素、地高辛素、熒光素
2、標記方法
(1)切口平移法
(2)隨機引物法
(3)末端標記法
(4)單鏈DNA探針標記
(5)寡 核苷酸 探針標記法


