HIV RNA定量測定（病毒載量測定）標準操作規程(SOP)
1 范圍
本章規定了測定HIV病毒載量常用方法的實驗室條件、方法、結果判定以及應用,適用于血漿中HIV病毒載量的測定。
2 規范性引用文件
Guidelines for the Use of Antiretroviral HIV-Infected Adults and Adolescents MMWR Recommendations and Reports April 24, 1998/47(RR-5); 42-82.
Chiron? Product insert (Quantiplex? HIV-RNA), L6170 rev 5.0, June 1994 Roche AMPLICOR HIV MONITOR? TEST Procedure Manual.
Fractions of HIV-1 Seropositive Persons by Two Nucleic Acid Amplification Assays, AIDS. Research and Human Retrovirus 1993; (9):259-265.
試劑準備區、樣品處理區、擴增區和擴增產物分析區，并設在不同房間。前兩區為擴增前區，后兩區為擴增后區。各區的功能是：
3.1.1.1 試劑準備區：擴增試劑的配制、分裝和保存。
3.1.1.2 樣品處理區：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。
3.1.1.3 擴增區：核酸擴增。
3.1.1.4 擴增產物分析區：擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
3.1.2 擴增前區與擴增后區應嚴格分開，須使用不同的房間，兩區之間最好有一定的間隔。
3.1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配制。
3.1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑準備區可設在同一房間內：
3.1.4.1 在生物安全柜內操作。
3.1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
3.1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
3.1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。推薦的程序是：
（1）實驗前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。
（2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進行試驗。
（3）一個實驗區域在同一時間段只進行一種實驗。
（4）實驗結束后，移出個人專用材料至個人專用區域保管；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。
3.1.5 各區域的 儀器 、設備、器具、工作服和試劑應為該區專用，不得交叉使用。
3.2 人員
進行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術培訓。
3.3 設施和設備
3.3.1 根據檢測項目配備相應的設施和設備。
3.3.2 各區域的設施和設備應為區域性專用，開展特定試驗時應根據要求在相應區域放置專用設備。以下是各區域應配備的設備：
3.3.2.1 試劑準備區：冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。
3.3.2.2 樣品處理區：冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器。
3.3.2.3 擴增區：核酸擴增設備、冰箱、離心機、加樣器、廢棄物容器。
3.3.2.4 擴增產物分析區：冰箱、離心機、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、核酸污染物處理設備等。
3.3.2.5 配備-80℃冰箱。
3.3.3 各區域應備有工作人員專用的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套，必要時配備防護眼鏡和/或口罩。
4 方法和試劑
4.1 方法
常用的HIV RNA定量測定方法有逆轉錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）。
4.2 試劑
HIV RNA定量檢測包括bDNA、RT-PCR、NASBA試劑。
5 實驗室管理
HIV核酸檢測實驗室應制定嚴格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規定并嚴格遵照執行。
5.1 生物安全
必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。
5.2 嚴格執行分區制度
5.2.1 按照要求嚴格進行實驗室分區。
5.2.2 各區域只用于特定的操作，不得從事其它工作。
