人的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握人體微量血液體外培養(yǎng)制備染色體 標(biāo)本的方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
人外周血液中的小淋巴細(xì)胞，幾乎都處在G1期（G0期），一般情況下是不再分裂的，在培養(yǎng)液中加入植物凝血素（PAH）時(shí)，這種小淋巴細(xì)胞受刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，隨后進(jìn)入有絲分裂。這樣經(jīng)過短期培養(yǎng)，秋水仙素的處理，低滲和固定，就可獲得大量的有絲分裂細(xì)胞。本方法已為臨床醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)、藥理學(xué)、遺傳毒理學(xué)等方面的廣泛應(yīng)用。
三、實(shí)驗(yàn)材料
儀器設(shè)備
5毫升滅菌注射器，離心管，吸管，試管架，量桶，培養(yǎng)瓶，試劑瓶，酒精燈，燒杯，天平，離心機(jī)，恒溫培養(yǎng)箱。
材料和試劑
1．人的外周血淋巴細(xì)胞。
2．Giemsa染色液原液：配方是0.5g Giemsa＋33ml甘油＋33ml甲醇。配制方法是：在研缽內(nèi)先用少量甘油與Giemsa粉混合，研磨至無(wú)顆粒為止，再將其余甘油倒入，攪拌后56oC水浴保溫2小時(shí)，再加入甲醇，攪勻后保存于棕色瓶中。
3．Giemsa染色液應(yīng)用液：用0.1M pH7.4磷酸緩沖液稀釋Giemsa染色液原液10倍。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 培養(yǎng)液的分裝：在無(wú)菌室內(nèi)或接種罩內(nèi)，用移液管將培養(yǎng)液和其他各試劑分裝入10毫升培養(yǎng)瓶中，每班8~10瓶，每瓶量為：
1640培養(yǎng)液4毫升
小牛血清1毫升
PHA0.2毫升
肝素0.05毫升
雙抗（青霉素和鏈霉素）：終濃度為：100單位/毫升
pH：7.2~7.4用3.5%碳酸氫鈉調(diào)節(jié)
