新型隱球菌的檢測方法

新型隱球菌是隱球菌屬家族中主要致病病原菌，含5個(gè)血清型,包括A、B、C、D和AD型。它在免疫抑制患者中的感染發(fā)病率約為5％-10％，在免疫功能正常的人群中感染率約為十萬分之一，可以感染人體的任何組織和臟器，最常見的部位是中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其次為肺部和皮膚。

墨汁涂片、真菌培養(yǎng)、隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗(yàn)是常用的真菌學(xué)檢測方法。墨汁涂片可以早期、快速診斷隱球菌感染。真菌培養(yǎng)是確診隱球菌病的“金標(biāo)準(zhǔn)”。隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗(yàn)對隱球菌中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的診斷具有非常好的敏感性和特異性。

1、 墨汁染色

腦脊液等標(biāo)本離心取沉淀物或者挑取菌液1環(huán)涂于潔凈玻片上，然后加印度墨汁1環(huán)，覆蓋玻片后鏡檢。陽性結(jié)果應(yīng)為：有厚莢膜和有細(xì)胞核的出芽（圓形或卵圓形芽生孢子，孢子外有一寬厚的莢膜包裹，菌體透亮，莢膜可比菌體大1-3倍，菌體內(nèi)有一個(gè)至幾個(gè)反光顆粒，即脂質(zhì)顆粒）。

該法是診斷隱球菌感染直接而快速的檢測方法，但在發(fā)病的初期，墨汁染色鏡檢1～3次往往常呈陰性，需要反復(fù)多次檢查。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，有病例在第6次腦脊液墨汁染色鏡檢才找到隱球菌。出現(xiàn)假陰性的原因，一方面可能是發(fā)病早期病原學(xué)檢出率低；另一方面，隱球菌主要集中在腦膜或腦室脈絡(luò)叢肉芽腫細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致穿刺取樣的困難；同時(shí)培養(yǎng)時(shí)間的長短也影響陽性的檢出率，大多實(shí)驗(yàn)室隱球菌培養(yǎng)一般是5天左右發(fā)報(bào)告，但有的隱球菌培養(yǎng)第10天左右才出現(xiàn)陽性，故易造成漏診。

2、真菌培養(yǎng)

新型隱球菌于25-37°C環(huán)境下均可生長，在SDA斜面瓊脂上，呈奶油色酵母菌落；SDA固體培養(yǎng)基（不能含會(huì)抑制隱球菌生長的放線酮）上菌落圖片呈球形或橢圓形，不同于念珠菌的卵圓形，很少見到菌絲。

3、隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗(yàn)

利用免疫學(xué)方法，在乳膠顆粒上吸附隱球菌抗體，待檢樣本存在隱球菌莢膜多糖抗原時(shí)可發(fā)生特異性凝集反應(yīng)。

該方法具有較高的敏感性和特異性，在早期快速診斷中明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和鏡檢，但不可避免假陽性和假陰性的存在。有文獻(xiàn)報(bào)道，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、結(jié)節(jié)病、類風(fēng)濕因子、巨球蛋白以及毛孢子菌屬、二氧化碳噬纖維菌屬和抗酸桿菌，均與新生隱球菌莢膜多糖抗原存在交叉抗原，引起假陽性；另一方面，操作過程中乳膠手套中的滑石粉、洗滌反應(yīng)板中的清潔劑污染腦脊液標(biāo)本，也可引起假陽性。而高濃度隱球菌抗原所致的鉤狀現(xiàn)象和體內(nèi)未知非特異性蛋白對隱球菌抗原的掩蓋效應(yīng)，卻能夠引起假陰性。