高通量細(xì)胞篩選技術(shù)(high throughput cell-based screening technology)

高通量細(xì)胞篩選技術(shù) (high 2 throughput cell - based screening technology) 是以高通量方式研究基因功能最有效的方法之一。通常 , 基因功能的初步篩選在 96 孔或 384 孔板上進(jìn)行 , 通過(guò)基因轉(zhuǎn)染將候選基因?qū)爰?xì)胞 , 或直接將基因表達(dá)產(chǎn)物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。篩選測(cè)定方法基于要研究的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)問(wèn)題 , 例如 , 要研究抗血管生成活性 , 選用內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、遷移和粘附等分析測(cè)定 ; 研究免疫調(diào)節(jié)活性 , 可選擇淋巴細(xì)胞或造血細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的分析測(cè)定 ; 研究神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子活性 , 可選用神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞存活、突起生長(zhǎng)測(cè)定。除上述與細(xì)胞表型或形態(tài)學(xué)相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)外 , 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、糖代謝、能量產(chǎn)生和代謝產(chǎn)物分析 (metabolic control analysis) 等代謝通路也是基因功能重要的研究?jī)?nèi)容。

　　結(jié)合抗體芯片技術(shù)、多路測(cè)定技術(shù) (multiplexing) 等新的檢測(cè)方法 [12 ～ 14 ] , 高通量細(xì)胞篩選的應(yīng)用更為廣泛。另外 , 隨著熒光成像讀板儀 (fluorescence image plate reader ,FLIPR) 、定量 PCR 、高通量熒光激活細(xì)胞分類器 (HT 2 FACS) 等檢測(cè)方法和技術(shù)的不斷發(fā)展和應(yīng)用 , 靈敏度和重現(xiàn)性這兩個(gè)高通量細(xì)胞篩選的關(guān)鍵問(wèn)題也逐步得以解決。

初篩得到的基因通常選用二級(jí)分析模型進(jìn)行功能驗(yàn)證 , 驗(yàn)證方法可能通量略低 , 但與功能的相關(guān)性更強(qiáng)。