劃痕實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)：如何解決劃痕寬度不一致的問題

基本原理：

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。

劃痕實(shí)驗(yàn)在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程，是研究細(xì)胞遷移的體外試驗(yàn)方法中最簡(jiǎn)單的方法。

實(shí)驗(yàn)方法：

基本的步驟包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法是使用移液器吸頭在單層細(xì)胞上手動(dòng)制造“劃痕”，該方法雖然操作簡(jiǎn)單，成本低廉，但存在“劃痕”不一致的缺陷，即使實(shí)驗(yàn)者反復(fù)練習(xí)也很難保證“劃痕”寬度一致，往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度低。

Ibidi Culture Insert方法是解決傳統(tǒng)方法“劃痕”寬度不一致的有效方法，該方法通過培養(yǎng)插件能夠得到寬度一致的500um “劃痕”，是進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)的首選方法。

Culture Insert方法詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟：

準(zhǔn)備材料：細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture Insert（如圖 德國ibidi公司購買），鑷子。

1，準(zhǔn)備細(xì)胞懸液：根據(jù)細(xì)胞類型將細(xì)胞懸液稀釋至3-7×105個(gè)/ml，濃度控制在24小時(shí)內(nèi)融合成單層。

2，在培養(yǎng)插件的每個(gè)孔中加入70ul細(xì)胞懸液，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3，細(xì)胞貼壁后，使用滅菌的鑷子移除培養(yǎng)插件。

4，加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。

5，每隔4-6小時(shí)拍照記錄。

6，根據(jù)收集圖片使用Wimasis分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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