按細胞比重分離B細胞

按細胞比重分離B細胞

1.將2～3ml含3×107純化的B細胞（B細胞>90％）的細胞懸液加到3ml Percoll溶液（比重1.074）上，水平離心1000×g 20分鐘。

2.吸去無細胞上清液，交界面的低密度B細胞和大部分Percoll溶液。由于此時細胞沉淀非常松散，需留下約0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀細胞。輕敲離心管，用留下的液體懸浮高密度B細胞。

3.用洗滌液分別洗滌低密度B細胞和高密度B細胞兩次，每次離心500×g 10分鐘。最后，測定細胞數和細胞活力，用1～2ml含5％小牛血清的洗滌液將細胞配成適當濃度。

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